Bendram bakterijų skaičiui nustatyti naudojamas Kocho metodas. 1 ml tiriamosios medžiagos iš atitinkamo praskiedimo supilama į tuščią sterilią Petri lėkštelę ir supilama 10 - 15 ml ištirpinto ir atvėsinto iki 45 0 C MPA, sumaišoma su skysčiu, sukant lėkštelę ant stalo paviršiaus.
Išdirbus pasėlius, suskaičiuojamos kolonijos, išaugusios agaro paviršiuje ir gilumoje. Norėdami tai padaryti, puodelis dedamas aukštyn kojomis juodame fone, kiekviena suskaičiuota kolonija yra pažymėta žymekliu ant stiklo. Buvo vertinamos tik tos lėkštelės, kuriose išaugo nuo 30 iki 300 kolonijų. Jei lėkštėje išaugo daugiau nei 300 kolonijų ir analizės pakartoti negalima, kolonijas galima skaičiuoti esant stipriam šoniniam apšvietimui naudojant padidinamąjį stiklą ir specialią plokštelę su tinkleliu.
Kolonijų skaičius skaičiuojamas ne mažiau kaip 20 kvadratų, kurių plotas 1 cm 2 skirtingose lėkštelės vietose. Apskaičiuojamas vidutinis kolonijų skaičius 1 cm2 ir padauginamas iš lėkštelės ploto.
Skaičiuojant kolonijas, galima naudoti specialų bakterijų skaičiavimo prietaisą PSB.
Skaičiuojant kolonijas kiekviename lėkštelyje, nustatomas bakterijų skaičius 1 ml (cm 3) arba 1 g tiriamosios medžiagos, atsižvelgiant į praskiedimą. Galutinis bakterijų skaičius imamas kaip kolonijų skaičiavimo lėkštelėse, užkrėstose dviem gretimais praskiedimais, rezultatų aritmetinis vidurkis.
Pavyzdys: praskiedimas 10 -1 - 250 kolonijų, praskiedimas 10 -2 - 23 kolonijos.
Bendras bakterijų skaičius = 250 x 10 + 23 x 100 / 2 = 2400 cfu/ml = 2,4 x 10 2 cfu/ml (kolonijas formuojantys vienetai ml).
Tyrimo rezultatą galima suapvalinti iki 2–3 reikšminių skaičių.
Titravimo metodas.
Naudojamas SPM skaičiui nustatyti.
1 etapas: medžiagos homogenizavimas. Jei reikia, paruoškite suspensiją, kad mikroorganizmai būtų perkelti į skystąją fazę.
2 etapas: ruošiant skiedimų seriją.
3 etapas: sėjami atrinkti tiriamosios medžiagos tūriai (100, 10, 1 ml) ir jos skiedimai po 1 ml į skystą maistinę terpę. Siekiant padidinti metodo tikslumą, kiekvieną tūrį galima lygiagrečiai pasėti į kelias maistinės terpės dalis (dviejų, trijų, penkių eilių sėjai). Optimalus – tai tris kartus kartojimas (pakankamas patikimumas už santykinai mažą kainą).
4 etapas: atsižvelgiant į augimą skystoje maistinėje terpėje ir sėjimą iš teigiamų tūrių į kietą maistinę terpę.
5 etapas: mikroorganizmų, auginamų kietoje maistinėje terpėje, identifikavimas. Šiuo atveju atsižvelgiama į kultūrines savybes ir, jei reikia, atliekami papildomi tyrimai (tinktorinių, morfologinių, biocheminių ir serologinių savybių tyrimas).
Jei naudojamas vienos eilės metodas, paprastai rezultatas išreiškiamas norimo mikroorganizmo titru, kuris laikomas mažiausiu tūriu (didžiausiu praskiedimu), kuriame jis vis dar buvo rastas.
Jei buvo naudojamas kelių eilučių metodas, rezultatai registruojami naudojant specialias lenteles, kurios leidžia nustatyti titrą arba indeksą (TNI), remiantis teigiamų tūrių, suteikusių augimą, deriniu.
Yra žinoma palyginti nedaug metodų, kaip išskirti bakterijas kaip grynas kultūras. Dažniausiai tai daroma atskiriant atskiras ląsteles ant kietos auginimo terpės, naudojant juostelių padengimo metodą arba į lėkštes pilant nedidelį kiekį skystos kultūros ( ribojantis skiedimo metodas). Tačiau atskiros kolonijos gavimas ne visada garantuoja kultūros grynumą, nes kolonijos gali augti ne tik iš atskirų ląstelių, bet ir iš jų grupių. Jei mikroorganizmai formuoja gleives, tada prie jų dažnai prisitvirtina svetimos formos. Valymui geriau naudoti neselektyvią terpę (NSM), nes joje geriau auga ir lengviau aptinkami teršiantys mikroorganizmai.
Išskirtos kolonijos ant kietos maistinės terpės gaunamos sijojant mikroorganizmų suspensiją mentele ( Kocho metodas) arba naudojant bakteriologinę kilpą ( išsekimo insulto metodas). Dėl mechaninio mikroorganizmų ląstelių atskyrimo iš kiekvienos jų gali susidaryti izoliuota vieno tipo mikrobų kolonija.
Sijojimas mentele (Koch metodas) gaminamas tokia seka:
1) ant lėkštelės Nr. 1 maistinės terpės paviršiaus sterilia pipete užlašinamas lašas sodrinimo kultūros ir paskirstomas sterilia mentele;
2) išimkite mentelę, greitai uždarykite puodelį ir perkelkite mentelę į puodelį Nr. 2 jo nesterilizuodami. Imituokite kultūros pasiskirstymą visame terpės paviršiuje, paliesdami jos paviršių ta pačia mentelės puse, kuri anksčiau buvo naudojama mėginiui paskirstyti;
3) lygiai tokie patys veiksmai atliekami puodelyje Nr. 3, po to mentele sterilizuojama;
4) indai su sėklomis dedami į termostatą ir inkubuojami optimalioje temperatūroje.
Po tam tikro laiko puodeliai nuimami nuo termostato ir tiriamas mikroorganizmų augimas. Paprastai puodelyje Nr. 1 stebimas nuolatinis bakterijų augimas, o tolesniuose puodeliuose – kolonijos.
Kilpinis sijojimas (nusileidimo ruožo metodas) apima bakteriologinės kilpos sėjimą iš sodrinimo kultūros ant agaro terpės paviršiaus Petri lėkštelėse. Pirmajame etape ant agaro terpės uždedama keletas lygiagrečių smūgių, naudojant kultivavimo kilpą (4.2 pav., A). Kilpa sterilizuojama, atšaldoma ant nesokuliuotos agaro terpės dalies ir daromi brūkštelėjimai pirmiesiems statmena kryptimi (4.2 pav., B). Tada kilpa vėl sterilizuojama, atšaldoma ir braukiama kryptimi IN(4.2 pav.), o po kitos sterilizacijos – kryptimi G(4.2 pav.). Puodeliai dedami į termostatą ir po tam tikro laiko atsižvelgiama į rezultatus. Paprastai ant smūgių A Ir B daug kolonijų auga (kartais nuolatinis augimas), o ant smūgių IN Ir G susidaro izoliuotos kolonijos.
4.2 pav. Bakterijų sijojimo, siekiant gauti izoliuotas kolonijas, schema
Serijiniai skiedimai kietoje terpėje- paprasčiausias plokštelių sėjimo būdas, kurį sudaro tai, kad mėginį pasėjus į mėgintuvėlį su steriliu išlydytu ir atvėsintu agaru, terpė sumaišoma, supilama į Petri lėkštelę ir leidžiama sukietėti. Norėdami gauti gerai izoliuotas kolonijas, paruoškite nuoseklų dešimteriopų skiedimų seriją ir įpilkite 1 ml mėginių tiesiai į puodelį, įpilkite 15–20 ml išlydyto agaro terpės ir sumaišykite purtant puodelį. Kartais atskiros kolonijos patenka į agarą ir gali būti pašalintos tik mechaniškai. Blogai ir tai, kad bakterijos kurį laiką praleidžia išlydyto agaro temperatūros aplinkoje.
Pagrindiniai mikrobiologijos, virusologijos ir imunologijos raidos etapai
Tai apima:
1.Empirinės žinios(iki mikroskopų išradimo ir jų panaudojimo mikropasauliui tirti).
J. Fracastoro (1546) pasiūlė gyvąją infekcinių ligų sukėlėjų prigimtį – contagium vivum.
2.Morfologinis laikotarpis truko apie du šimtus metų.
Antonie van Leeuwenhoek 1675 m pirmą kartą aprašyti pirmuonys, 1683 metais – pagrindinės bakterijų formos. Prietaisų (maksimalus X300 mikroskopų padidinimas) ir mikropasaulio tyrimo metodų netobulumas neprisidėjo prie greito mokslo žinių apie mikroorganizmus kaupimo.
3.Fiziologinis laikotarpis(nuo 1875 m.) – L. Pastero ir R. Kocho era.
L. Pasteur - fermentacijos ir skilimo procesų mikrobiologinių pagrindų tyrimas, pramoninės mikrobiologijos raida, mikroorganizmų vaidmens medžiagų apykaitos gamtoje išaiškinimas, atradimas. anaerobinis mikroorganizmai, principų raida aseptika, metodus sterilizacija, susilpnėjimas ( slopinimas)virulentiškumas ir gavimas vakcinos (vakcinų padermės).
R. Koch – izoliavimo metodas grynosios kultūros ant kietų maistinių medžiagų, bakterijų dažymo anilino dažais metodai, juodligės, choleros sukėlėjų atradimas ( Kocho kablelis), tuberkulioze (Koch lazdos), mikroskopijos technologijos tobulinimas. Henle kriterijų, žinomų kaip Henle-Koch postulatai (triada), eksperimentinis pagrindimas.
4.Imunologinis laikotarpis.
I.I. Mechnikovas yra „mikrobiologijos poetas“ pagal vaizdinį Emilio Roux apibrėžimą. Jis sukūrė naują mikrobiologijos erą – imuniteto (imuniteto) doktriną, išplėtodamas fagocitozės teoriją ir pagrįsdamas ląstelinę imuniteto teoriją.
Tuo pačiu metu buvo kaupiami duomenys apie gamybą organizme antikūnų prieš bakterijas ir jų toksinai, kuri leido P. Ehrlichui sukurti humoralinę imuniteto teoriją. Vėlesnėje ilgalaikėje ir vaisingoje diskusijoje tarp fagocitinių ir humoralinių teorijų šalininkų buvo atskleista daug imuniteto mechanizmų ir gimė mokslas. imunologija.
Vėliau buvo nustatyta, kad paveldimas ir įgytas imunitetas priklauso nuo koordinuoto penkių pagrindinių sistemų veiklos: makrofagų, komplemento, T ir B limfocitų, interferonų – pagrindinės histokompatibilumo sistemos, teikiančios įvairias imuninio atsako formas. I. I. Mechnikovas ir P. Erlichas 1908 m. buvo įteikta Nobelio premija.
1892 metų vasario 12 d Rusijos mokslų akademijos posėdyje D.I. Ivanovskis pranešė, kad tabako mozaikos ligos sukėlėjas yra filtruojamas virusas. Ši data gali būti laikoma gimtadieniu virusologija o D.I Ivanovskis yra jo įkūrėjas. Vėliau paaiškėjo, kad virusai sukelia ligas ne tik augalams, bet ir žmonėms, gyvūnams ir net bakterijoms. Tačiau tik nustačius geno prigimtį ir genetinį kodą, virusai buvo priskirti gyvajai gamtai.
5. Kitas svarbus mikrobiologijos raidos etapas buvo antibiotikų atradimas. 1929 metais A. Flemingas atrado peniciliną ir prasidėjo antibiotikų terapijos era, paskatinusi revoliucinę pažangą medicinoje. Vėliau paaiškėjo, kad mikrobai prisitaiko prie antibiotikų, o atsparumo vaistams mechanizmų tyrimas leido atrasti antrąjį. ekstrachromosominis (plazmidinis) genomas bakterijos.
Studijuoja plazmidės parodė, kad jie yra dar paprastesnės struktūros organizmai nei virusai, ir skirtingai bakteriofagai nekenkia bakterijoms, bet suteikia joms papildomų biologinių savybių. Plazmidžių atradimas gerokai praplėtė supratimą apie gyvybės egzistavimo formas ir galimus jos raidos kelius.
6. Modernus molekulinė genetinė stadija Mikrobiologijos, virusologijos ir imunologijos raida prasidėjo XX amžiaus antroje pusėje, siejant su genetikos ir molekulinės biologijos pasiekimais bei elektroninio mikroskopo sukūrimu.
Eksperimentai su bakterijomis įrodė DNR vaidmenį perduodant paveldimus požymius. Bakterijų, virusų, o vėliau ir plazmidžių, kaip molekulinės biologijos ir genetinių tyrimų objektų, naudojimas leido giliau suprasti esminius gyvybės procesus. Genetinės informacijos kodavimo bakterijų DNR principų išaiškinimas ir genetinio kodo universalumo nustatymas leido geriau suprasti molekulinius genetinius modelius, būdingus labiau organizuotiems organizmams.
Escherichia coli genomo dekodavimas leido sukurti ir persodinti genus. Iki šiol genų inžinerija sukūrė naujas kryptis biotechnologijos.
Iššifruota daugelio virusų molekulinė genetinė organizacija ir jų sąveikos su ląstelėmis mechanizmai, nustatytas virusinės DNR gebėjimas integruotis į jautrios ląstelės genomą ir pagrindiniai viruso kancerogenezės mechanizmai.
Imunologija patyrė tikrą revoliuciją, kuri gerokai peržengė infekcinės imunologijos ribas ir tapo viena iš svarbiausių pagrindinių medicinos ir biologijos disciplinų. Iki šiol imunologija yra mokslas, tiriantis ne tik apsaugą nuo infekcijų. Šiuolaikine prasme Imunologija – mokslas, tiriantis organizmo savigynos mechanizmus nuo visko, kas genetiškai svetima, išlaikant struktūrinį ir funkcinį organizmo vientisumą.
Šiuo metu imunologija apima daugybę specializuotų sričių, tarp kurių, be infekcinės imunologijos, svarbiausios yra imunogenetika, imunomorfologija, transplantacijos imunologija, imunopatologija, imunohematologija, onkoimunologija, ontogenezės imunologija, vakcinologija ir taikomoji imunodiagnostika.
Mikrobiologija ir virusologija kaip pagrindiniai biologijos mokslai taip pat apima daugybę nepriklausomų mokslo disciplinų, turinčių savo tikslus ir uždavinius: bendrosios, techninės (pramonės), žemės ūkio, veterinarijos ir tos, kurios yra svarbiausios žmonijai. medicininė mikrobiologija ir virusologija.
Medicinos mikrobiologija ir virusologija tiria žmogaus infekcinių ligų sukėlėjus (jų morfologiją, fiziologiją, ekologiją, biologines ir genetines savybes), kuria jų auginimo ir identifikavimo metodus, specifinius diagnostikos, gydymo ir profilaktikos metodus.
Grynoji mikroorganizmo kultūra yra tos pačios rūšies ląstelių populiacija, išauginta sterilioje maistinėje terpėje. Gryna kultūra išskiriama gavus vienos pirminės ląstelės palikuonis. Kultūra gali augti atskirų kolonijų pavidalu ant kietos maistinės terpės.
Grynųjų aerobinių mikroorganizmų kultūrų išskyrimo metodai.
Visus grynųjų kultūrų išskyrimo iš mikrobų mišinių metodus galima suskirstyti į 2 grupes:
Mechaninio mikroorganizmų atskyrimo principu pagrįsti metodai;
Biologinėmis mikroorganizmų savybėmis pagrįsti metodai.
Mechaninio mikroorganizmų atskyrimo principais pagrįsti metodai
Sijojimas mentele pagal Drigalskį
Paimkite 3 Petri lėkštes su maistine terpe. Ant pirmojo puodelio kilpa arba pipete užlašinamas lašas tiriamosios medžiagos ir perbraukiamas mentele per visą agaro paviršių. Tada mentele perkeliama į antrąjį puodelį, o ant mentelės likusi kultūra įtrinama į maistinės terpės paviršių. Tada mentele perkeliama į trečią Petri lėkštelę ir tokiu pačiu būdu atliekama inokuliacija. Pirmoje plokštelėje auga didžiausias kolonijų skaičius (tvirtas augimas), trečioje - minimalus skaičius atskirai esančių kolonijų pavidalu.
Išsekimo smūgio metodas
Norėdami sutaupyti laikmenos ir indų, galite naudoti vieną puodelį, padalydami jį į 4 sektorius ir paeiliui išsėjant juostele. Norėdami tai padaryti, paimkite medžiagą su kilpa ir nubrėžkite lygiagrečių brūkšnių seriją 5 mm atstumu vienas nuo kito, pirmiausia išilgai pirmojo sektoriaus paviršiaus, o tada paeiliui pasėkite visus kitus sektorius, kad ląstelės liktų kilpoje. . Su kiekvienu paskesniu smūgiu pasėtų ląstelių skaičius mažėja. Po sijojimo lėkštelės apverčiamos aukštyn kojomis, kad ant Petri lėkštelės dangtelio susidaręs kondensatas netrukdytų gauti izoliuotų kolonijų. Puodeliai laikomi termostate 1-7 dienas, nes skirtingų mikroorganizmų augimo greitis nėra vienodas.
Taigi pirmuosiuose sektoriuose gaunamas nuolatinis augimas, o po vėlesnių smūgių auga izoliuotos kolonijos, atstovaujančios vienos ląstelės palikuonis.
Apšilimo būdas
Leidžia atskirti sporas formuojančias bacilas nuo nesporinių formų. Tiriamąją medžiagą kaitinkite vandens vonioje 80°C temperatūroje 10-15 minučių. Tokiu atveju vegetatyvinės formos žūva, o sporos išsaugomos ir, pasėjus į atitinkamą maistinę terpę, sudygsta, suformuodamos tik sporas formuojančių bakterijų kolonijas.
Sodrinimo metodas
Tiriama medžiaga pasėjama ant selektyvių maistinių medžiagų, kurios skatina tam tikros rūšies mikroorganizmų augimą.
Laboratorinių gyvūnų užkrėtimo būdas
Šis metodas naudojamas grynajai kultūrai išskirti iš patologinės medžiagos, užterštos svetima mikroflora, arba tuo atveju, kai tiriamoje medžiagoje yra labai mažai patogeninių mikroorganizmų.
Infekcijai parenkamos gyvūnų rūšys, jautriausios įtariamam patogenui.
Pavyzdžiui, norint išskirti pneumokoką nuo skreplių, užsikrečia baltoji pelė. Šis gyvūnas yra labai jautrus šiam mikrobui ir atsparus kitiems mikrobams, randamiems skrepliuose. Šiuo atžvilgiu pneumokokas greitai dauginasi pelės kūne, o kiti mikrobai miršta. Praėjus 18-20 valandų po užsikrėtimo, pelė paaukojama ir iš širdies paimtas kraujas pasėjamas į maistinę terpę. Kadangi kraujyje yra vienas pneumokokas, maistinėje terpėje auga gryna kultūra.
Biologinėmis mikroorganizmų savybėmis pagrįsti metodai
Biologiniai grynųjų kultūrų išskyrimo metodai yra pagrįsti atsižvelgimu į vieną ar kitą išskirto mikrobo savybę, kuri išskiria jį iš kitų, sumaišytų su juo.
Šukevičiaus metodas
Naudojamas judrių mikroorganizmų izoliavimui. Bandomoji medžiaga pasėjama į mėgintuvėlyje esančio pasvirusio agaro kondensacinį vandenį. Dauginimosi metu judrios mikrobų formos iš kondensacinio vandens pasklinda visame agare, tarsi „šliauždamos“ ant jo paviršiaus. Iš viršutinės augimo dalies į kondensacinį vandenį sėjama šviežia maistinė terpė. Tokiu būdu atliekant keletą subkultūrų, galiausiai gaunama gryna judrių bakterijų kultūra.
Slopinimo metodas
Pirmasis grynosios kultūros izoliacijos etapas
Iš tiriamos medžiagos paruošiamas tepinėlis, dažomas Gramu ir tiriamas mikroskopu.
Petri lėkštelėse pasėkite maistinių medžiagų agaru. Šiuo tikslu tiriamoji medžiaga, jei reikia, skiedžiama steriliu fiziologiniu tirpalu. Vienas lašas paruošto skiedimo kilpa užlašinamas ant maistinės terpės paviršiaus Petri lėkštelėje ir mentele kruopščiai įtrinamas į terpę, tolygiai paskirstant medžiagą per visą jos paviršių. Po sėjos puodelis apverčiamas aukštyn kojomis, paženklinamas ir 18-24 valandoms pastatomas į 37ºC termostatą.
Sėjama pasirenkamoje maistinėje terpėje.
Kultūros atliekamos diferencinės diagnostikos terpėje.
Laboratoriniai gyvūnai yra užkrėsti tiriamąja medžiaga.
Vokiečių gydytojas ir mokslininkas Robertas Kochas (1843-1910) gavo Nobelio premiją už mikrobiologinį darbą kovojant su tuberkulioze. Jis taip pat sukūrė daug fundamentalių mikrobiologinių tyrimų metodų, kai kurie iš jų naudojami ir šiandien.
Viso gyvenimo darbas
XIX amžiaus pabaigoje nuo tuberkuliozės Europoje mirė beveik trečdalis visų vidutinio amžiaus suaugusiųjų. To meto gydytojai ir mokslininkai daug bandė rasti gydymą. Kochas Robertas nebuvo išimtis, kova su šia sunkia liga tapo jo misija, viso jo gyvenimo darbu. Nepaisant didžiulės pažangos šios ligos nustatymo ir galimo gydymo srityje, net gavęs Nobelio medicinos premiją už šį darbą, mokslininkas nenustojo tobulinti tyrimų metodų, kurie turėjo didelę įtaką visai mikrobiologijai.
Jaunystė ir profesijos pasirinkimas
Būsimo mokslininko tėvai buvo neturtingi kalnakasiai, kurie stebėjosi, kokį gabų berniuką jiems davė likimas. 1843 m. Clausthal mieste (Vokietija) gimęs Heinrichas Hermannas Robertas Kochas vaikystėje buvo tikras vunderkindas vaikas. Būdamas penkerių jis jau skaitė laikraščius, o kiek vėliau domėjosi klasikine literatūra, buvo šachmatų žinovas. Mano susidomėjimas gamtos mokslais prasidėjo vidurinėje mokykloje, kur biologiją pasirinkau kaip mėgstamiausią dalyką.
1866 m., būdamas 23 metų, Heinrichas Robertas Kochas įgijo mokslų daktaro laipsnį ir kitą dešimtmetį praleido dirbdamas gydytoju įvairiose ligoninių ir vyriausybinėse mokslo draugijose. 1876 m. jis paskelbė savo pagrindinį juodligės ligos tyrimą, kuris jam atnešė plačią šlovę. Po kelerių metų jis buvo paskirtas sveikatos biuro patarėju, kur didžiąją laiko dalį praleido spręsdamas su tuberkulioze susijusias problemas.
Tuberkuliozės priežasties nustatymas
Šiuolaikinė medicina žino daugybę daugelio ligų priežasčių. Tais laikais, kai gyveno Kochas Robertas, šios žinios nebuvo tokios dažnos. Vienas iš pirmųjų svarbių mokslininko atradimų buvo Mycobacterium tuberculosis, sukeliančios šią mirtiną ligą, nustatymas. Robertas Kochas, tyrinėdamas infekcijos priežastis, tyčia užkrėtė jūrų kiaulytes medžiaga iš vieno iš trijų užkrėstų gyvūnų: beždžionių, galvijų ir žmonių. Dėl to buvo nustatyta, kad užsikrėtusių kiaulių bakterijos buvo identiškos toms, kuriomis jos buvo užsikrėtusios, nepriklausomai nuo infekcijos šaltinio.
Kocho postulatai
Kokį indėlį į mikrobiologiją padarė Robertas Kochas? Vienas iš įtakingiausių metodų buvo pasiūlymas, kad ligos sukėlėją būtų galima labai patikimai nustatyti, jei būtų įvykdytos keturios sąlygos, kurios vėliau tapo žinomos kaip Kocho postulatai. Štai jie:
- Mikroorganizmas turi sukelti ligas visuose organizmuose, kuriuose jo yra gausiai, todėl neužkrėstuose organizmuose jų neturėtų būti.
- Įtariamas mikrobas turi būti izoliuotas ir auginamas gryna forma.
- Pakartotinis mikrobų įsisavinimas turėtų sukelti anksčiau neužkrėstų organizmų ligas.
- Įtariamas mikrobas turi būti iš naujo izoliuotas nuo bandomojo organizmo, užaugintas gryna forma ir identiškas iš pradžių išskirtam mikrobui.
Bakteriologijos ir mikrobiologijos įkūrėjas
Tarp ligų, kurias tyrinėjo vokiečių gydytojas Robertas Kochas (1876 m. juodligė ir 1882 m. tuberkuliozė), 1883 m. buvo ir cholera. 1905 metais mokslininkas buvo apdovanotas Nobelio fiziologijos arba medicinos premija. Dar būdamas medicinos studentas Heinrichas Hermannas Robertas Kochas labai domėjosi patologija ir infekcinėmis ligomis. Kaip gydytojas, dirbo daugelyje mažų miestelių visoje Vokietijoje, o per Prancūzijos ir Prūsijos karą (1870-1872) savanoriškai išėjo į frontą kaip karo chirurgas.
Vėliau buvo paskirtas vietiniu medicinos darbuotoju, kurio pagrindinė pareiga buvo tirti infekcinių bakterinių ligų plitimą. Biotechnologijų taikymas medicinoje vis dar labai priklauso nuo Kocho principų dokumentuojant infekcinių ligų priežastis. Didysis mokslininkas mirė 1910 metais Švarcvaldo regione (Vokietija), jam buvo 66 metai.
Juodligės tyrimai
Tuo metu, kai gyveno Robertas Kochas, juodligė Wöllstein vietovėje buvo plačiai paplitusi tarp ūkio gyvūnų. Mokslininkas tuo metu neturėjo jokios mokslinės įrangos, bibliotekos ir ryšiai su kitais mokslininkais buvo nepasiekiami. Tačiau tai jo nesustabdė ir jis pradėjo tyrinėti šią ligą. Jo laboratorija buvo 4 kambarių butas, kuris buvo jo namai, o pagrindinė jo įranga – žmonos dovana – mikroskopas.
Pollenderio, Rayerio ir Davaino bacilos anksčiau buvo aptiktos kaip juodligės sukėlėjai, o Kochas pasiryžo moksliškai įrodyti, kad ši bacila iš tikrųjų buvo ligos priežastis. Jis naminėmis medžio drožlėmis peles pasėjo juodligės bacilomis, paimtomis iš nuo šios ligos nugaišusių ūkinių gyvūnų blužnies. Buvo nustatyta, kad graužikai mirė būtent dėl infekcijos patekimo į gyvūnų kraują. Šis faktas patvirtino kitų mokslininkų išvadas, kurios teigė, kad liga gali būti perduodama per gyvūnų, sergančių juodlige, kraują.
Juodligės bacilos yra atsparios išorinei aplinkai
Tačiau tai Kocho netenkino. Jis taip pat norėjo sužinoti, ar šie mikrobai gali sukelti ligas, jei jie niekada neturėjo sąlyčio su jokiais gyvūnų organizmais. Norėdami išspręsti šią problemą, jis gavo grynąsias bacilų kultūras. Robertas Kochas, tyrinėdamas ir fotografuodamas juos, padarė išvadą, kad nepalankiomis sąlygomis jie gamina sporas, kurios gali atlaikyti deguonies trūkumą ir kitus bakterijoms neigiamus veiksnius. Taigi jie gana ilgai gali išgyventi išorinėje aplinkoje, o susidarius tinkamoms sąlygoms, atstatomas jų gyvybingumas, iš sporų atsiranda bacilos, galinčios užkrėsti gyvus organizmus, į kuriuos patenka, nepaisant to, kad anksčiau turėjo. jokio kontakto su jais.
Robertas Kochas: atradimai ir pasiekimai
Savo kruopštaus darbo dėl juodligės rezultatus Kochas pademonstravo Breslau universiteto botanikos profesoriui Ferdinandui Cohnui, kuris subūrė savo kolegas, kad pamatytų šį atradimą. Tarp susirinkusiųjų buvo ir anatominės patologijos profesorius Konheimas. Kocho darbas visiems paliko didelį įspūdį, o po to, kai 1876 m. buvo paskelbtas straipsnis botanikos žurnale, Kochas iškart išgarsėjo. Tačiau jis toliau dirbo Wöllstein dar ketverius metus ir per tą laiką patobulino savo bakterijų įrašymo, dažymo ir fotografavimo metodus.
Gyvenimas Berlyne
Vėliau, jau Berlyne, jis toliau tobulino bakteriologinius metodus, taip pat išrado naujus – grynas bakterijas augino kietoje terpėje, pavyzdžiui, bulvėse. Sritis, kurioje Robertas Kochas ir toliau dirbo, – mikrobiologija – iki šiol išliko siaura jo specialybė. Jis taip pat sukūrė naujus bakterijų dažymo metodus, kurie padarė jas labiau matomus ir padėjo jas atpažinti. Viso šio darbo rezultatas – sukurti metodai, kuriais patogenines bakterijas galima paprastai ir lengvai gauti grynoje kultūroje, be kitų organizmų, ir jas aptikti bei identifikuoti. Praėjus dvejiems metams po atvykimo į Berlyną, Kochas atrado tuberkuliozės bacilą, taip pat būdą, kaip ją auginti gryna forma.
Kova su cholera
Kochas vis dar užsiėmė darbu prieš tuberkuliozę, kai 1883 m. buvo išsiųstas į Egiptą kaip Vokietijos komisijos, tiriančios choleros protrūkį toje šalyje, vadovas. Čia jis atrado Vibrio, kuris sukelia ligą, ir atvežė į Vokietiją grynąsias kultūras. Jis taip pat sprendė panašią problemą Indijoje. Remdamiesi jo žiniomis apie Vibrio cholerae biologiją ir plitimo būdą, mokslininkai suformulavo kovos su epidemija taisykles, kurias 1893 m. Drezdene patvirtino Didžiosios valstybės ir kurios sudarė iki šiol naudojamų kontrolės metodų pagrindą.
Paskyrimas į aukštas pareigas
1885 m. Robertas Kochas, kurio biografija kilusi iš mažo miestelio ir neturtingos šeimos, buvo paskirtas Berlyno universiteto higienos profesoriumi. 1890 m. paskirtas generaliniu chirurgu, o 1891 m. tapo Medicinos fakulteto profesoriumi emeritu ir naujojo infekcinių ligų instituto direktoriumi. Per šį laikotarpį Kochas grįžo į savo darbą kovojant su tuberkulioze. Jis bandė sustabdyti ligą vaistu, kurį pavadino tuberkulinu, sukurtu iš mikobakterijų. Buvo sukurtos dvi vaisto versijos. Pirmasis iš jų iškart sukėlė didelių ginčų. Deja, šio vaisto gydomoji galia buvo gerokai perdėta, o į jį dedamos viltys nepasiteisino. Apie naująjį tuberkuliną (antroji versija) Kochas paskelbė 1896 m., jo gydomoji vertė taip pat nuvylė, tačiau vis dėlto dėl jo buvo atrastos diagnostinės vertės medžiagos.
Ir tada maras, maliarija, tripanosomozė...
1896 m. Kochas išvyko į Pietų Afriką ištirti galvijų maro kilmės. Nepaisant to, kad šios ligos priežasties nepavyko išsiaiškinti, protrūkis vis tiek buvo suvaldytas. Po to Indijoje ir Afrikoje buvo imtasi maliarijos, Blackwater karštinės, tripanosomozės ir galvijų maro gydymo. Jo pastebėjimai apie šias ligas buvo paskelbti 1898 m. Netrukus po grįžimo į Vokietiją jo kelionės po pasaulį tęsėsi. Šį kartą tai buvo Italija, kur jis patvirtino sero Ronaldo Rosso darbą maliarijos srityje ir atliko naudingą įvairių maliarijos formų etiologijos ir jų kontrolės chininu tyrimą.
Indėlis į mikrobiologiją: garbės prizai ir medaliai
Būtent šiais paskutiniais savo gyvenimo metais Kochas padarė išvadą, kad bacilos, sukeliančios žmonių ir galvijų tuberkuliozę, nėra tapačios. Jo pareiškimas Tarptautiniame medicinos kongrese prieš tuberkuliozę Londone 1901 m. sukėlė daug ginčų, tačiau dabar žinoma, kad Kocho požiūris buvo teisingas. Jo darbas kovojant su šiltine paskatino idėją, kad liga nuo žmogaus žmogui perduodama daug dažniau nei nuo geriamojo vandens, ir tai paskatino imtis naujų kontrolės priemonių.
1904 m. gruodį Kochas buvo išsiųstas į Rytų Afriką tirti galvijų maro, kur jis atliko svarbius stebėjimus ne tik apie ligą, bet ir apie patogenines Babesia ir Trypanosoma rūšis bei erkių platinamą spirochetozę. Profesorius Robertas Kochas buvo apdovanotas daugybe premijų ir medalių, buvo garbės narys Berlyno, Vienos, Neapolio, Niujorko ir kt. mokslo draugijose ir akademijose. Jis buvo apdovanotas Vokiečių Karūnos ordinu, Vokiečių Raudonojo erelio ordino Didžiuoju kryžiumi. Daugelyje šalių didžiojo mikrobiologo garbei buvo pastatyti atminimo ženklai ir paminklai. Daktaras Kochas mirė 1910 m. gegužės 27 d. Baden-Badene.
Vokietija per šimtmečius sukūrė daug novatoriškų mokslo protų, o vienas didžiausių to meto mokslininkų buvo Robertas Heinrichas Hermannas Kochas, padėjęs pamatus bakteriologijos studijoms ir padėjęs paaiškinti įvairių bakterinių ligų priežastis ir galimus gydymo būdus.
Jis buvo bebaimis tyrinėtojas, nes buvo atsakingas už precedento neturinčias pastangas tirti gyvybei pavojingas ligas, tokias kaip juodligė, tuberkuliozė ir daugelis kitų. Šis eruditas mokslininkas taip pat suvaidino svarbų vaidmenį kuriant modernias laboratorijas. Robertas Kochas buvo ne tik gabus mokslininkas, bet ir genijus, o per visą gyvenimą gautų apdovanojimų ir medalių skaičius yra geriausias jo indėlio į pasaulio medicinos mokslą įrodymas.
