Өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (HPLC). GPM.1.2.0005.15 Өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматограф Шингэн хроматографийн аргын зарчим

Оршил

Бүлэг 1. Шингэн хроматографийн аргын үндсэн ойлголт ба ангилал

1.1 Шингэн хроматографийн төхөөрөмж

Бүлэг 2. HPLC-ийн мөн чанар

2.1 Өргөдөл

Бүлэг 3. Байгаль орчны объектын шинжилгээнд HPLC ашиглах жишээ

Бүлэг 4. HPLC төхөөрөмж

Уран зохиол

Өргөдөл

Оршил

Хроматографийн аргуудижил төстэй бүтэцтэй органик бодисыг тодорхойлох, хэмжихэд зайлшгүй шаардлагатай байдаг. Гэсэн хэдий ч хийн хроматографи болон өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматограф нь хүрээлэн буй орчны бохирдуулагчийн ердийн шинжилгээнд хамгийн өргөн хэрэглэгддэг. Ундны болон бохир усны органик бохирдуулагчийн хийн хроматографийн шинжилгээг анх савласан багана ашиглан хийж байсан бол хожим нь кварцын хялгасан багана өргөн тархсан. Капилляр баганын дотоод диаметр нь ихэвчлэн 0.20-0.75 мм, урт нь 30-105 м байдаг.Усан дахь бохирдуулагч бодисыг шинжлэхэд хамгийн оновчтой үр дүнд фенил бүлгийн 5-ын агууламжтай метил фенил силиконуудын янз бүрийн зузаантай капилляр багануудыг ашиглах үед ихэвчлэн хүрдэг. ба 50%. Капилляр баганыг ашиглан хроматографийн техникийн сул тал нь ихэвчлэн дээжийг нэвтрүүлэх систем юм. Загвар нэвтрүүлэх системийг бүх нийтийн болон сонгомол гэсэн хоёр бүлэгт хувааж болно. Бүх нийтийнх нь хуваах, задлахгүй шахах систем, баганад "хүйтэн" шахах, температурын программчлалаар ууршуулах зэрэг орно. Сонгомол оролтыг ашиглах үед хавханд завсрын барьж цэвэрлэх, толгойн зайны шинжилгээ гэх мэт. Бүх нийтийн тарилгын системийг ашиглах үед дээжийг бүхэлд нь баганад оруулдаг бөгөөд сонгомол тарилгын үед зөвхөн тодорхой хэсгийг л нэвтрүүлдэг. Сонгомол тарилгын тусламжтайгаар олж авсан үр дүн нь илүү нарийвчлалтай байдаг, учир нь баганад орж буй хэсэг нь зөвхөн дэгдэмхий бодис агуулдаг тул техникийг бүрэн автоматжуулах боломжтой.

Бохирдуулагчийн хяналтанд ашигладаг хийн хроматографийн детекторуудыг ихэвчлэн хөдөлгөөнт фазын бүрэлдэхүүн хэсэг бүрт хариу үйлдэл үзүүлдэг универсал, химийн ижил төстэй шинж чанартай тодорхой бүлгийн бодисын хөдөлгөөнт үе шатанд хариу үйлдэл үзүүлдэг сонгомол гэж хуваадаг. Бүх нийтийн детекторуудад дөл иончлол, атомын ялгаралт, масс спектрометрийн детектор, хэт улаан туяаны спектрометр орно. Усны шинжилгээнд ашигладаг сонгомол детекторууд нь электрон барих (галоген атом агуулсан бодисыг сонгох), термион (азот, фосфор агуулсан нэгдлүүдийг сонгох), фотоионжуулалт (үнэрт нүүрсустөрөгчийг сонгох), электролитийн дамжуулалтын мэдрэгч (галоген атом агуулсан нэгдлүүдийг сонгох) юм. , хүхэр ба азот). Илрүүлж болох хамгийн бага бодисын хэмжээ нь секундэд нанограммаас пикограмм хүртэл хэлбэлздэг.

Өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматограф(HPLC) нь хийн хроматографаар шинжлэх боломжгүй олон тооны дулаанд тэсвэртэй нэгдлүүдийг тодорхойлох хамгийн тохиромжтой арга юм. Орчин үеийн агрохимийн бодисууд, үүнд метил карбонат ба фосфорорганик шавьж устгах бодисууд болон бусад дэгдэмхий бус бодисууд ихэвчлэн шингэн хроматографийн шинжилгээний объект болдог. Өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматограф нь хүрээлэн буй орчны хяналтад ашигладаг бусад аргуудын дунд улам бүр өргөн тархаж байгаа бөгөөд энэ нь дээж бэлтгэх автоматжуулалтын хувьд гайхалтай ирээдүйтэй учраас.

БҮЛЭГ 1. ШИНГЭН ХРОМАТОГРАФИЙН АРГЫН ҮНДСЭН ОЙЛГОЛТ, АНГИЛАЛ

Шингэний хроматограф нь хөдөлгөөнгүй фазын зөөвөрлөгчийн төрлөөс хамааран хэд хэдэн ангилалд хуваагддаг. Цаасан болон нимгэн давхаргын хроматографийн энгийн багаж хэрэгсэл нь аналитик практикт эдгээр аргуудыг өргөнөөр ашиглахад хүргэсэн. Гэсэн хэдий ч баганын шингэн хроматографийн агуу чадвар нь энэхүү сонгодог аргын тоног төхөөрөмжийг сайжруулахад түлхэц болж, HPLC-ийг хурдан нэвтрүүлэхэд хүргэсэн. Өндөр даралтын дор баганаар дамжуулагч бодисыг нэвтрүүлэх нь нарийн тархсан сорбентыг ашигласнаар шинжилгээний хурдыг эрс нэмэгдүүлж, салгах үр ашгийг мэдэгдэхүйц нэмэгдүүлэх боломжтой болсон. HPLC арга нь одоогоор органик нэгдлүүдийн цогц хольцыг тусгаарлах, тоон болон чанарын шинжилгээ хийх боломжийг олгодог.

Тусгаарлах (элюулах) бодисыг суурин фазтай харилцан үйлчлэх механизмд үндэслэн шингээх, хуваах, ион солилцох, хасах, ион-хос, лиганд солилцоо, ойрын хроматографийг ялгадаг.

Адсорбцийн хроматографи. Адсорбцийн хроматографийн аргаар тусгаарлах нь гадаргуу дээр идэвхтэй туйлширсан төвүүдтэй хөнгөн цагаан исэл эсвэл цахиурлаг гель зэрэг шингээгч бодистой харилцан үйлчлэлийн үр дүнд хийгддэг. Уусгагч (угаагч) нь туйлшралгүй шингэн юм. Сорбцийн механизм нь сорбентын туйлын гадаргуу ба шинжилж буй бүрэлдэхүүн хэсгийн молекулуудын туйл (эсвэл туйлшрах чадвартай) хэсгүүдийн хоорондох тодорхой харилцан үйлчлэлээс бүрдэнэ (Зураг 1).

Цагаан будаа. 1. Адсорбцийн шингэний хроматографи.

Хуваалтын хроматографи. Шингэн хроматографийн тархалтын хувилбарт бодисын холимгийг ялгах нь холилдохгүй хоёр фазын тархалтын коэффициентүүдийн зөрүүгээс шалтгаалж явагддаг - ялгаруулагч (хөдөлгөөнт фаз) ба сорбент дээр байрлах фаз (хөдөлгөөнгүй үе).

At хэвийн үе шатХуваалтын шингэний хроматограф нь сорбентын гадаргуу дээр (ихэнхдээ цахиурын гель) залгагдсан туйлшралгүй ялгаруулагч ба туйлын бүлгийг ашигладаг. Нитрил, амин бүлэг гэх мэт туйлын бүлгүүдийг агуулсан орлуулсан алкилхлоросилануудыг цахиурын гель гадаргуугийн хувиргагч (загагдсан фазууд) болгон ашигладаг (Зураг 2). Залгаастай фазыг ашиглах нь суурин фазын гадаргуугийн сорбцийн шинж чанарыг нарийн хянаж, өндөр салгах үр дүнд хүрэх боломжийг олгодог.

Цагаан будаа. 2. Залгасан фазтай хуваалтын хроматограф (хэвийн фазын сонголт).

Урвуу үе шатшингэний хроматографи нь сорбентын гадаргуу дээр залгагдсан туйлшруулагч ба туйл бус бүлгүүдийн (урт алкилийн гинж) хоорондын хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн тархалтад суурилдаг (Зураг 3).

Цагаан будаа. 3. Залгасан фазтай хуваалтын хроматограф (урвуу фазын сонголт).

Дэмждэг фазын шингэний хроматографийн бага өргөн хэрэглэгддэг хувилбар бол суурин тулгуур дээр шингэн хөдөлгөөнгүй фаз хуримтлагдах явдал юм.

Онцгой (гель нэвтэрдэг)Хроматографи нь шингэний хроматографийн нэг хувилбар бөгөөд сорбентын нүхэнд байрлах уусгагч ба түүний хэсгүүдийн хооронд урсаж буй уусгагчийн хооронд молекулуудын тархалтаас болж бодисууд хуваагддаг.

АфинХроматографи нь салангид уураг (эсрэгбие) нь сорбент (синтетик давирхай) гадаргуу дээр залгагдсан бодис (эсрэгтөрөгч) -тэй өвөрмөц харилцан үйлчлэлд суурилдаг бөгөөд эдгээр нь уурагтай нэгдмэл (коньюгат) үүсгэдэг.

Органик бус шинжилгээнд ион солилцоо, ион хос, лиганд солилцооны хроматографийг голчлон ашигладаг.

Хроматографийн ялгах үндсэн үзүүлэлтүүд.

Хроматографийн ялгах үндсэн үзүүлэлтүүд нь хольцын бүрэлдэхүүн хэсгийн хадгалах хэмжээ ба хадгалах хугацаа юм (Зураг 4).

Хадгалах хугацаа tR нь дээжийг баганад оруулснаас хойш харгалзах оргилын дээд хэмжээ гарах хүртэл өнгөрсөн хугацаа юм. Хадгалах хугацааг F-ийн эзэлхүүний хурдаар үржүүлснээр бид VR хадгалах эзэлхүүнийг олж авна.

Залруулсан хадгалалтын хугацаа гэдэг нь шингээгдээгүй бүрэлдэхүүн хэсгийн хамгийн дээд оргилоос харгалзах нэгдлийн оргил хүртэл өнгөрсөн хугацаа юм.

tR" = tR - t0;

Нормчилсан буюу зассан хадгалах хэмжээ нь баганын үхсэн эзлэхүүний V0-д тохируулсан хадгалах хэмжээ, өөрөөр хэлбэл шингээгүй бүрэлдэхүүн хэсгийн хадгалах хэмжээ юм.

VR" = VR - V0;

Хадгалах шинж чанар нь хөдөлгөөнгүй фаз дахь бодисын массыг хөдөлгөөнт фаз дахь бодисын масстай харьцуулсан харьцаагаар тодорхойлогддог хүчин чадлын коэффициент k" юм: k" = mn / mp;

k" утгыг хроматограммаас хялбархан тодорхойлж болно.

Хроматографийн ялгах хамгийн чухал үзүүлэлтүүд нь түүний үр ашиг ба сонгомол чанар юм.

Онолын хавтангийн өндрөөр (HETP) хэмжигдэх ба тэдгээрийн тоотой (N) урвуу хамааралтай баганын үр ашиг нь өндөр байх тусам ижил хугацаанд ялгарах бодисын оргил нь нарийсдаг. Үр ашгийн утгыг хроматограммаас дараах томъёогоор тооцоолж болно.

N = 5.54 . (tR/1/2) 2 ,

Хаана tR- хадгалах хугацаа,

w 1/2 - хагас өндөрт оргил өргөн

Нэг баганад онолын хавтангийн тоо, баганын урт L ба сорбентийн ширхэгийн дундаж диаметр dc-ийг мэдэхийн тулд онолын хавтан (HETT) ба бууруулсан өндөр (RHETT) -тай тэнцэх өндрийн утгыг олж авахад хялбар байдаг.

HETT = L/N PVET = HETT/d в

Эдгээр шинж чанарууд нь янз бүрийн төрлийн баганын үр ашгийг харьцуулах, сорбентын чанар, баганыг дүүргэх чанарыг үнэлэх боломжийг олгодог.

Хоёр бодисыг ялгах сонгомол байдлыг тэгшитгэлээр тодорхойлно.

Хоёр бүрэлдэхүүн хэсгийн хольцыг салгах талаар авч үзэхэд RS тусгаарлах зэрэг нь бас чухал үзүүлэлт юм.

;

RS утга нь 1.5-аас их буюу тэнцүү байвал оргил цэгүүдийг шийдсэн гэж үзнэ.

Хроматографийн үндсэн параметрүүд нь дараахь тэгшитгэлээр тодорхойлогддог.

;

Тусгаарлалтын сонгомол байдлыг тодорхойлдог хүчин зүйлүүд нь:

1) сорбентын химийн шинж чанар;

2) уусгагч ба түүний хувиргагчийн найрлага;

3) ялгаж буй хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн химийн бүтэц, шинж чанар;

4) баганын температур

1.1 Шингэн хроматографийн төхөөрөмж

Орчин үеийн шингэн хроматографид янз бүрийн түвшний нарийн төвөгтэй багажуудыг ашигладаг - хамгийн энгийн системээс эхлээд янз бүрийн нэмэлт төхөөрөмжөөр тоноглогдсон өндөр зэрэглэлийн хроматограф хүртэл.

Зураг дээр. 4. Аливаа хроматографийн системд байх шаардлагатай хамгийн бага бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулсан шингэн хроматографийн блок диаграммыг үзүүлэв.

Цагаан будаа. 4. Шингэн хроматографын блок диаграмм.

Шахуурга (2) нь уусгагчийн тогтмол урсгалыг бий болгох зориулалттай. Түүний загвар нь үндсэндээ систем дэх ажлын даралтаар тодорхойлогддог. 10-500 МПа хүчин чадалтай ажиллахын тулд поршен (тариур) эсвэл поршений төрлийн шахуурга ашигладаг. Эхний сул тал нь уусмалаар дүүргэхийн тулд үе үе зогсолт хийх хэрэгцээ, хоёр дахь нь дизайны илүү нарийн төвөгтэй байдал, үр дүнд нь өндөр үнэ юм. 1-5 МПа бага даралттай энгийн системүүдийн хувьд хямд перисталтик шахуургыг амжилттай ашигладаг боловч тогтмол даралт, урсгалын хурдыг хангахад хэцүү байдаг тул тэдгээрийн хэрэглээ нь бэлтгэл ажилд хязгаарлагддаг.

Инжектор (3) нь ялгаж буй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хольцын дээжийг нэлээд өндөр давтагдах чадвартай баганад оруулахыг баталгаажуулдаг. Энгийн системүүд"Stop-flow" сорьцын тарилга нь насосыг зогсоохыг шаарддаг тул Reodyne-ийн боловсруулсан гогцоо сорууртай харьцуулахад тийм ч тохиромжтой биш юм.

HPLC багана (4) нь өндөр даралтыг тэсвэрлэх чадвартай, зузаан ханатай зэвэрдэггүй ган хоолой юм. Сорбент бүхий баганын баглаа боодлын нягтрал, жигд байдал нь чухал үүрэг гүйцэтгэдэг. Зузаан ханатай шилэн баганыг нам даралтын шингэн хроматографид амжилттай ашиглаж байна. Тогтмол температурыг термостатаар хангадаг (5).

Шингэн хроматографийн илрүүлэгч (6) нь урсгалын эстэй бөгөөд тэдгээрт урсаж буй элюентийн зарим шинж чанарыг тасралтгүй хэмждэг. Ерөнхий зориулалтын детекторуудын хамгийн түгээмэл төрөл нь хугарлын илтгэгчийг хэмждэг рефрактометр ба тогтсон долгионы урттай (ихэвчлэн хэт ягаан туяаны бүсэд) уусгагчийн шингээлтийг хэмждэг спектрофотометрийн детекторууд юм. Рефрактометрийн давуу тал (мөн спектрофотометрийн сул тал) нь хромофорын бүлгийг агуулаагүй байж болох нэгдлүүдийн төрөлд бага мэдрэмжтэй байдаг. Нөгөө талаас рефрактометрийн хэрэглээ нь изократ системээр хязгаарлагддаг (тогтмол уусгагч найрлагатай) тул энэ тохиолдолд уусгагч градиент ашиглах боломжгүй юм.

Байгаль орчны бохирдуулагчийн шинжилгээнд ихэвчлэн ашиглагддаг HPLC баганууд нь 25 см урт, 4.6 мм дотоод диаметртэй, октадецилийн бүлгүүдээр залгагдсан 5-10 мкм хэмжээтэй бөмбөрцөг цахиурт гель хэсгүүдээр савлагдсан байдаг. IN өнгөрсөн жилЖижиг хэсгүүдээр дүүрсэн жижиг дотоод диаметр бүхий баганууд гарч ирэв. Ийм баганыг ашиглах нь уусгагчийн хэрэглээ, шинжилгээний хугацааг багасгах, мэдрэмж, салгах үр ашгийг нэмэгдүүлэх, мөн баганыг спектрийн мэдрэгчтэй холбох асуудлыг хялбаршуулдаг. 3.1 мм-ийн дотоод диаметр бүхий багана нь ашиглалтын хугацааг уртасгах, аналитик давтагдах чадварыг сайжруулах зорилгоор хамгаалалтын хайрцаг (урьдчилсан багана) -аар тоноглогдсон.

Орчин үеийн HPLC төхөөрөмжүүдэд ашигладаг детекторууд нь ихэвчлэн хэт ягаан туяаны диодын массив илрүүлэгч, флюресцент мэдрэгч, цахилгаан химийн детектор юм.

Практик ажилд салах нь ихэвчлэн нэг замаар биш, харин хэд хэдэн механизмаар нэгэн зэрэг явагддаг гэдгийг санах нь зүйтэй. Иймээс гадуурхах тусгаарлалт нь шингээлтийн нөлөөгөөр, шингээлтийн тусгаарлалт нь тархалтын нөлөөгөөр, мөн эсрэгээр хүндрэлтэй байж болно. Түүгээр ч зогсохгүй дээжинд агуулагдах бодисуудын иончлолын зэрэг, суурьшил, хүчиллэг байдал, молекулын жин, туйлшрах чадвар болон бусад үзүүлэлтүүдийн ялгаа их байх тусам эдгээр бодисыг ялгах өөр механизм үүсэх магадлал өндөр болно.

Практикт хамгийн өргөн тархсан нь "урвуу фазын" (тархалтын) хроматографи бөгөөд хөдөлгөөнгүй фаз нь туйлшралгүй, харин хөдөлгөөнт фаз нь туйлтай байдаг (өөрөөр хэлбэл "шууд фазын" хроматографийн урвуу).

Дэлхийн ихэнх лабораторид тэргүүлэх ач холбогдол бүхий 16 PAH-ийн бүлэгт HPLC эсвэл CMS шинжилгээ хийдэг.

БҮЛЭГ 2. HPLC-ийн мөн чанар

Өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн (HPLC) хувьд хроматографийн баганад явагдаж буй үйл явцын шинж чанар нь хийн хроматографийн үйл явцтай ерөнхийдөө ижил байдаг. Ганц ялгаа нь шингэнийг хөдөлгөөнгүй фаз болгон ашиглах явдал юм. Шингэн хөдөлгөөнт фазын өндөр нягтрал, баганын өндөр эсэргүүцэлтэй тул хий болон шингэний хроматографи нь багаж хэрэгслийн хувьд ихээхэн ялгаатай байдаг.

HPLC-д цэвэр уусгагч эсвэл тэдгээрийн хольцыг ихэвчлэн хөдөлгөөнт фаз болгон ашигладаг.

Шингэний хроматографид ялгаруулагч гэж нэрлэгддэг цэвэр уусгагчийн (эсвэл уусгагчийн холимог) урсгалыг бий болгохын тулд хроматографын гидравлик системд багтсан насосыг ашигладаг.

Адсорбцийн хроматографи нь гадаргуу дээр идэвхтэй төвтэй цахиур гель эсвэл хөнгөн цагаан исэл зэрэг шингээгч бодисуудтай харилцан үйлчлэлийн үр дүнд хийгддэг. Янз бүрийн дээжийн молекулуудын шингээх төвүүдтэй харилцан үйлчлэх чадварын ялгаа нь баганын дагуу хөдөлгөөнт фазтай хөдөлгөөн хийх явцад тэдгээрийг бүс болгон хуваахад хүргэдэг. Энэ тохиолдолд олж авсан бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн бүсийг тусгаарлах нь уусгагч ба шингээгчтэй харилцан үйлчлэхээс хамаарна.

HPLC-д хамгийн өргөн хэрэглэгддэг нь өөр өөр эзэлхүүн, гадаргуугийн талбай, нүхний диаметр бүхий цахиурлаг гель шингээгч юм. Хөнгөн цагааны исэл болон бусад шингээгчийг бага ашигладаг. Үүний гол шалтгаан нь:

HPLC-ийн онцлог шинж чанартай өндөр даралтанд савлах, ашиглахыг зөвшөөрдөггүй механик хүч чадал хангалтгүй;

цахиурын гель нь хөнгөн цагааны исэлтэй харьцуулахад илүү өргөн хүрээний сүвэрхэг, гадаргуугийн талбай, нүхний диаметртэй байдаг; Хөнгөн цагааны ислийн катализаторын идэвхжил мэдэгдэхүйц их байгаа нь дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн задрал эсвэл тэдгээрийн эргэлт буцалтгүй химисорбцийн улмаас шинжилгээний үр дүнг гажуудуулахад хүргэдэг.

HPLC-д зориулсан илрүүлэгч

Өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (HPLC) нь үүсмэл хэлбэрээр ч гэсэн ямар нэг шалтгаанаар хийн хроматографид тохирох хэлбэрт хувиргах боломжгүй туйлширдаггүй бодисыг илрүүлэхэд ашиглагддаг. Ийм бодисууд, ялангуяа сульфоны хүчил, усанд уусдаг будагч бодис, зарим пестицид, жишээлбэл, фенил-мочевин деривативууд орно.

Илрүүлэгч:

Диодын матриц дээрх хэт ягаан туяаны мэдрэгч. Фотодиодуудын "матриц" (тэдгээрийн хоёр зуу гаруй) нь спектрийн хэт ягаан туяаны болон харагдахуйц бүсэд дохиог байнга бүртгэдэг бөгөөд ингэснээр сканнердах горимд UV-B спектрийн бичлэгийг хангадаг. Энэ нь тусгай үүрээр хурдан дамждаг бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн гажиггүй спектрийг өндөр мэдрэмжтэйгээр тасралтгүй бүртгэх боломжийг олгодог.

Оргил цэвэр байдлын талаар мэдээлэл өгдөггүй нэг долгионы урттай илрүүлэлттэй харьцуулахад диодын массивын бүрэн спектрийг харьцуулах чадвар нь таних үр дүнд илүү өндөр итгэлийг өгдөг.

Флюресценц мэдрэгч. Флюресцент детекторуудын маш их алдартай нь тэдний маш өндөр сонгомол мэдрэмж, байгаль орчныг бохирдуулагч бодисууд (жишээлбэл, полиаромат нүүрсустөрөгчид) флюресцент үүсгэдэгтэй холбоотой юм.

Цахилгаан химийн детекторыг амархан исэлдэг эсвэл буурдаг бодисыг илрүүлэхэд ашигладаг: фенол, меркаптан, амин, үнэрт нитро ба галоген дериватив, альдегид, кетон, бензидин.

PF-ийн удаан явцын улмаас багана дээрх хольцыг хроматографийн аргаар ялгахад маш их цаг зарцуулдаг. Үйл явцыг хурдасгахын тулд хроматографийг даралтын дор хийдэг. Энэ аргыг өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (HPLC) гэж нэрлэдэг.

Сонгодог шингэн баганын хроматографид ашигладаг тоног төхөөрөмжийг шинэчлэх нь үүнийг хамгийн ирээдүйтэй, орчин үеийн шинжилгээний аргуудын нэг болгосон. Өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографи нь бага ба өндөр молекул жинтэй дэгдэмхий бус термолабиль нэгдлүүдийг ялгах, бэлдмэлийн тусгаарлалт, чанарын болон тоон шинжилгээ хийхэд тохиромжтой арга юм.

Ашигласан сорбентийн төрлөөс хамааран энэ аргад хроматографийн 2 хувилбарыг ашигладаг: туйлшралгүй сорбент дээр туйлшралгүй шингээгч (шууд фазын сонголт) ба туйлтгүй сорбент дээр - урвуу фазын өндөр гэж нэрлэгддэг. -Гүйцэтгэлийн шингэний хроматографи (RPHPLC).

Угаагчаас ялгаруулагч руу шилжих үед HPLC-ийн нөхцөлд тэнцвэр нь туйлын сорбент ба усан бус PF-ийн нөхцлөөс хэд дахин хурдан тогтдог. Үүний үр дүнд OFVLC нь усан ба усан спиртийн уусмалуудтай ажиллахад хялбар болсон тул одоо маш их алдартай болсон. Ихэнх HPLC шинжилгээг энэ аргыг ашиглан хийдэг.

Илрүүлэгч. Баганын бие даасан бүрэлдэхүүн хэсгийн гаралтыг илрүүлэгч ашиглан бүртгэдэг. Бүртгүүлэхийн тулд та хөдөлгөөнт фазаас ирж буй, хольцын бүрэлдэхүүн хэсгийн шинж чанар, тоо хэмжээтэй холбоотой аливаа аналитик дохионы өөрчлөлтийг ашиглаж болно. Шингэн хроматографи нь гаралтын уусмалын гэрлийн шингээлт эсвэл гэрлийн ялгарал (фотометр ба флюориметрийн детектор), хугарлын илтгэгч (хугарлын детектор), потенциал ба цахилгаан дамжуулалт (цахилгаан химийн детектор) гэх мэт аналитик дохиог ашигладаг.

Тасралтгүй илрүүлсэн дохиог бичигчээр тэмдэглэдэг. Хроматограмм нь хольцын бие даасан бүрэлдэхүүн хэсгүүд баганыг орхих үед үүсдэг бичигч соронзон хальс дээр бичигдсэн илрүүлэгч дохионы дараалал юм. Хэрэв хольцыг салгавал гадаад хроматограмм дээр бие даасан оргилууд харагдана. Хроматограмм дахь оргилын байрлалыг бодис, оргилын өндөр эсвэл талбайг тодорхойлох зорилгоор - тоон тодорхойлох зорилгоор ашигладаг.

2.1 Өргөдөл

HPLC нь химийн шинжилгээний дараах чиглэлээр хамгийн өргөн хэрэглэгддэг (HPLC бараг ямар ч өрсөлдөөнгүй шинжилгээний объектуудыг онцолсон болно):

Хүнсний чанарын хяналт - тоник ба амт оруулагч нэмэлт, альдегид, кетон, витамин, сахар, будагч бодис, хадгалалтын бодис, дааврын эм, антибиотик, триазин, карбамат болон бусад пестицид, микотоксин, нитросоамин, полициклик үнэрт нүүрсустөрөгч гэх мэт.

Байгаль орчныг хамгаалах - фенол, органик нитро нэгдлүүд, моно болон полициклик үнэрт нүүрсустөрөгчид, олон тооны пестицид, үндсэн анион, катионууд.

Шүүх эмнэлэг - эм, органик тэсрэх бодис, будагч бодис, хүчтэй эм бэлдмэл.

Эмийн үйлдвэр - стероид гормонууд, органик синтезийн бараг бүх бүтээгдэхүүн, антибиотик, полимер бэлдмэл, витамин, уургийн бэлдмэл.

Анагаах ухаан - Биологийн шингэн дэх жагсаалтад орсон биохимийн болон эмийн бодисууд, тэдгээрийн метаболитууд (амин хүчлүүд, пурин ба пиримидинууд, стероид гормонууд, липидүүд) өвчнийг оношлох, эмийн бие даасан тунгийн зорилгоор биеэс зайлуулах хурдыг тодорхойлох.

Хөдөө аж ахуй - хэрэглэх бордооны шаардлагатай хэмжээг тодорхойлохын тулд хөрсөн дэх нитрат, фосфатын агууламжийг тодорхойлох, тэжээлийн тэжээллэг чанарыг (амин хүчил, витамин) тодорхойлох, хөрс, ус, хөдөө аж ахуйн бүтээгдэхүүн дэх пестицидийн шинжилгээ.

Биохими, биоорганик хими, генийн инженерчлэл, биотехнологи - сахар, липид, стероид, уураг, амин хүчил, нуклеозид ба тэдгээрийн дериватив, витамин, пептид, олигонуклеотид, порфирин гэх мэт.

Органик хими - органик синтезийн бүх тогтвортой бүтээгдэхүүн, будагч бодис, термолабиль нэгдлүүд, дэгдэмхий бус нэгдлүүд; органик бус хими (ионы хэлбэрээр бараг бүх уусдаг нэгдлүүд ба нарийн төвөгтэй нэгдлүүд).

хүнсний бүтээгдэхүүн, согтууруулах ундаа, согтууруулах ундаа, ундны ус, гэр ахуйн химийн бодис, үнэртэй ус үйлдвэрлэх бүх үе шатанд чанар, аюулгүй байдалд хяналт тавих;

хүний үйл ажиллагааны гамшиг, онцгой байдлын голомт дахь бохирдлын шинж чанарыг тодорхойлох;

мансууруулах, хүчтэй, хортой, тэсэрч дэлбэрэх бодисыг илрүүлэх, шинжлэх;

аж ахуйн нэгж, амьд организмын шингэн хаягдал, агаар, хатуу хог хаягдал дахь хортой бодис (полициклик болон бусад үнэрт нүүрсустөрөгч, фенол, пестицид, органик будаг, хүнд, шүлт, шүлтлэг металлын ион) байгаа эсэхийг тодорхойлох;

органик синтез, газрын тос, нүүрс боловсруулах, биохими, микробиологийн үйлдвэрлэлийн үйл явцыг хянах;

бордооны хөрсний чанар, хөрс, ус, бүтээгдэхүүнд пестицид, гербицид байгаа эсэх, түүнчлэн тэжээлийн тэжээллэг чанарт дүн шинжилгээ хийх; цогц судалгааны аналитик даалгавар; хэт цэвэр бодисын бичил хэмжээг олж авах.

БҮЛЭГ 3. БАЙГАЛЬ ОРЧНЫ ОБЪЕКТИЙН ШИНЖИЛГЭЭД HPLC АШИГЛАХ ЖИШЭЭ.

HPLC нь хүрээлэн буй орчны объектуудын PAH-ийг хянах арга юм

Полициклик үнэрт нүүрсустөрөгчид (PAHs) аюулын 1-р ангиллын экотоксикантуудын хувьд байгалийн объект дахь зөвшөөрөгдөх дээд концентрацийн (MAC) маш бага түвшинг тогтоосон. MPC болон түүнээс доош түвшинд PAH-ийг тодорхойлох нь аналитикийн хамгийн төвөгтэй асуудлуудын нэг бөгөөд тэдгээрийг шийдвэрлэхийн тулд өндөр технологийн аналитик аргуудыг (GC-MS, GC, HPLC) ашигладаг. Хяналтын аргыг сонгохдоо үндсэн шинж чанаруудад мэдрэмж ба сонгомол байдал, хурд, үр ашгийг нэмж оруулсан болно. мониторинг нь цуврал шинжилгээг хамардаг. Богино, жижиг диаметртэй багана дээрх HPLC сонголт нь эдгээр шаардлагыг бүрэн хангадаг. Энэхүү аргыг ашиглан зохиогчид аэрозол, цасан бүрхүүл, гадаргын ус гэсэн гурван байгалийн орчинд бензо[а]пиренийг хянах аргыг боловсруулж, баталгаажуулсан. Арга нь: энгийн стандартчилсан дээж бэлтгэх, үүнд PAH-ийг органик уусгагчаар гаргаж авах, хандны концентраци, баяжуулсан хандыг хроматографийн баганад шууд оруулах, спектрийн хэт ягаан туяаны бүсэд олон долгионы урттай фотометрийн илрүүлэлтийг ашиглах зэргээр тодорхойлогддог. , хадгалах хугацаа болон спектрийн харьцаа гэсэн хоёр параметрийг ашиглан хроматограмм дахь PAH оргилуудыг тодорхойлох. Аэрозоль дахь бензо[а]пиренийг 0.3-аас 450 нг/м3, гадаргын усанд 10-1000 нг/л, гадаргын цасан бүрхүүлд агууламжийг тодорхойлоход нийт алдаа 10%-иас хэтрэхгүй байна. нягтын хүрээ 0.5-аас 50 мкг/м2 хүртэл. Нэн тэргүүний PAH-ийг (12 хүртэл нэгдлүүдийг) нэгэн зэрэг тодорхойлох, задлан шинжлэлийн нэг төрлийн бус оргилуудыг бүртгэх тохиолдолд хувь хүний онцлогийг харгалзан хөдөлгөөнт фазын сонгомол байдал, илрүүлэх долгионы урт, баганын температурыг өөрчлөх замаар хандыг давтан тусгаарлахыг санал болгосон. PAH-ийн шинж чанарыг тодорхойлж байна.

1 . Орчны агаарын чанар. Бензо[a]пирений массын концентраци. HPLC аргыг ашиглан хэмжилт хийх арга зүй. MVI No 01-2000 гэрчилгээний гэрчилгээ.

2 . Гадаргуугийн болон цэвэршүүлсэн бохир усны чанар. Бензо[a]пирений массын концентраци. HPLC аргыг ашиглан хэмжилт хийх арга зүй. MVI No 01-2001 гэрчилгээний гэрчилгээ.

3 . Цасан бүрхүүлийн чанар. Бензо[a]пирений массын концентраци. HPLC аргыг ашиглан хэмжилт хийх арга зүй. MVI No 02-2001 гэрчилгээний гэрчилгээ.

Тээрмийн зэсийн масштабыг алюминотермик аргаар багасгах хаягдлыг ашиглан усан уусмалаас анилиныг зайлуулах

Бохир уснаас нүүрсустөрөгчийг зайлуулах асуудал бол яаралтай ажил юм. Химийн, нефть химийн болон бусад олон үйлдвэрүүдэд анилин ба түүний деривативууд үүсдэг бөгөөд энэ нь хорт бодис юм. Анилин бол маш хортой бодис бөгөөд MPC - 0.1 мг/м 3. Анилин ба түүний деривативууд нь усанд уусдаг тул таталцлын тунадасжилтаар зайлуулж чадахгүй.

Бохир усыг органик бохирдуулагчаас цэвэрлэх хамгийн сайн аргуудын нэг бол нөхөн сэргээгдэх (алюминосиликат, өөрчлөгдсөн шавар, мод, утас гэх мэт) болон нөхөн сэргээгдэх чадваргүй (идэвхжүүлсэн нүүрс, макро сүвэрхэг полимер материал гэх мэт) органик бус болон органик шингээгч бодисыг ашиглах явдал юм. ).

Сэргээх шингээгч нь янз бүрийн туйлшралтай органик бодисыг уснаас зайлуулж чаддаг. Үр дүнтэй шингээгчийг хайх нь яаралтай ажил юм.

Энэхүү тайланд Ереваны кабелийн үйлдвэр (OPMOErKZ)-ийн цувисан зэсийн масштабыг анилин сорбент болгон ашиглах чиглэлээр хийсэн судалгааны үр дүнг танилцуулж байна.

Хроматографийн судалгааг HPLC хроматограф / өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографи / систем (Waters 486 - детектор, Waters 600S - хянагч, Waters 626 - насос), бидний судалсан сорбентоор дүүргэсэн 250 х 4 мм-ийн баганад, хөдөлгөөнт төхөөрөмж дээр хийсэн. фазын хурд 1 мл/м / хөдөлгөөнт фаз нь бидний судалж буй уусгагч юм/, илрүүлэгч нь UV-254. Хэт ягаан туяаны спектроскопийн шинжилгээг Specord-50 спектрофотометр дээр хийсэн бөгөөд спектрийг ASPECT PLUS компьютерийн программ ашиглан авсан.

Усан дахь тодорхой хэмжээний анилин дээр сорбентуудын нарийн жигнэсэн хэсгүүдийг нэмсэн бөгөөд тэдгээрийн анхны концентраци нь янз бүр байв. Холимогийг 6 цагийн турш сайтар сэгсэрч, дараа нь дээжийг тунгаах хүртэл үлдээнэ. Шингээлт бараг 48 цагийн дотор дуусна.Тунасан анилины хэмжээг хэт ягаан туяаны спектрофотометр, түүнчлэн рефрактометрийн шинжилгээгээр тодорхойлно.

Эхлээд нүүрстөрөгчийн тетрахлорид дахь уусмалаас анилиныг зайлуулах үед OPMOErKZ-ийн шингээлтийн шинж чанарыг судалсан. Анилин сорбент 3-ыг хамгийн сайн шингээдэг болох нь тогтоогдсон (хүснэгт).

Мөн 0.01-0.0001 моль/л концентрацитай анилины усан уусмалд хэмжилт хийсэн. Хүснэгтэнд 0.01 М уусмалын өгөгдлийг харуулав.

Анилины 0.01 М усан уусмалаас 200С-ийн янз бүрийн сорбентоор анилиныг шингээх.

Заасан концентрацийн хязгаарт шингээлт нэмэгдэж, хугарлын илтгэгчээс шугаман хамааралтай болохыг өмнө нь тогтоосон. Анилины хэмжээг "хугарлын индекс - молийн концентраци" график хамаарлаас тодорхойлж, шингэний хроматографи болон хэт ягаан туяаны спектрийн шинжилгээний өгөгдлөөр зассан.

Усан уусмалын хамгийн идэвхтэй сорбент нь сорбент 3. Шингээсэн бохирдуулагчийн хэмжээг эхний уусмалд нэмсэн бохирдуулагчийн нийт хэмжээ ба эцсийн уусмал дахь үлдэгдэл хоёрын зөрүүгээр тооцсон.

Байгаль орчны объектуудын PAH-ийг тодорхойлох арга

Ихэвчлэн хийн хроматографи (GC) болон өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (HPLC) аргуудыг PAH-ийг тодорхойлоход ашигладаг. Тоон шинжилгээнд хангалттай үндсэн 16 PAH-ийг салгахад хийн хроматографид хялгасан судсан багана эсвэл HPLC-д ашигласан өндөр хүчин чадалтай баганыг ашиглана. Арван зургаан PAH-ийн шалгалт тохируулгын хольцыг сайн тусгаарладаг багана нь судалж буй дээжинд дагалдах органик нэгдлүүдийн дэвсгэрээс сайн тусгаарлагдах баталгаа болохгүй гэдгийг санах нь зүйтэй.

Шинжилгээг хялбарчлах, мөн хүрэхийн тулд Өндөр чанаролж авсан үр дүнгээс үзэхэд ихэнх аналитик процедур нь дээж дэх холбогдох нэгдлүүдийн бусад бүлгээс PAH-ийг урьдчилан тусгаарлах (салгах) үе шатыг агуулдаг. Ихэнх тохиолдолд шингэн-хатуу эсвэл шингэн-шингэн системд шингээх механизм, жишээлбэл цахиурын гель эсвэл хөнгөн цагааны исэл, заримдаа холимог механизм, жишээлбэл Sephadex ашиглан шингээх, хасах гэх мэт бага даралтын шингэн хроматографийн аргыг эдгээр зорилгоор ашигладаг.

Дээжийг урьдчилан цэвэрлэх аргыг ашиглах нь дараахь нөлөөллөөс зайлсхийх боломжийг олгодог.

Алифат нүүрсустөрөгч зэрэг бүрэн туйлшралгүй нэгдлүүд;

Дунд зэргийн болон хүчтэй туйлын нэгдлүүд, жишээлбэл, фталан, фенол, олон атомт спирт, хүчил;

Давирхай зэрэг өндөр молекул жинтэй нэгдлүүд.

Өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографид (HPLC) ихэвчлэн хоёр төрлийн детектор ашигладаг: флюориметрийн детектор эсвэл фотодиодын массив спектрофотометрийн детектор. Флюориметрийн илрүүлэлт дэх PAH-ийн илрүүлэх хязгаар нь маш бага тул энэ аргыг полиаромат нэгдлүүдийн ул мөрийн хэмжээг тодорхойлоход илүү тохиромжтой болгодог. Гэсэн хэдий ч сонгодог флюориметрийн детекторууд нь судалж буй нэгдлийн бүтцийн талаар бараг ямар ч мэдээлэл өгдөггүй. Орчин үеийн загварууд нь бие даасан нэгдлүүдийн онцлог шинж чанартай флюресценцийн спектрийг бүртгэх боломжийг олгодог боловч ердийн хэмжилтийн практикт өргөн ашиглагдаагүй байна. Фотодиодын массив (PDL) бүхий спектрофотометрийн детектор нь хэт ягаан туяаны болон үзэгдэх спектрийн муж дахь шингээлтийн спектрийг бүртгэх боломжийг олгодог бөгөөд эдгээр спектрийг танихад ашиглаж болно. Үүнтэй төстэй мэдээллийг хурдан сканнер илрүүлэгч ашиглан авах боломжтой.

Эдгээр PAH-ийг ялгах, тодорхойлох, тоон дүн шинжилгээ хийх аналитик аргыг сонгохдоо дараахь нөхцлийг харгалзан үзэх шаардлагатай.

Туршилтын дээжинд тодорхойлсон агууламжийн түвшин;

Холбогдох бодисын тоо;

Ашигласан аналитик процедур (хэмжилтийн техник);

Цуваа тоног төхөөрөмжийн хүчин чадал.

Ионы өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн тусламжтайгаар газрын шүлтлэг элемент ба магнийн хэмжээг тодорхойлох аргыг боловсруулах

Усны шинжилгээний асуудлыг шийдвэрлэх аргуудыг боловсруулж, сайжруулах нь аналитик химийн чухал асуудал юм. Өндөр даралтын өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн хөгжил нь ионы хроматограф гэж нэрлэгддэг ион солилцооны хроматографийн шинэ чиглэлийг хөгжүүлэхэд түлхэц болсон. Ионы хроматографийн сорбентыг нийлэгжүүлэх нь хэцүү байдаг, учир нь тэдгээрт тавигдах шаардлага маш их байдаг. Худалдааны хувьд өндөр үр дүнтэй катион солилцогч байхгүй тул динамикаар өөрчилсөн урвуу фазыг ашигласан бөгөөд үүнд хувиргагчийг нийлэгжүүлсэн: N-гексадецил-Н-деканил-параминобенойлсульфоны хүчил этил-диизопропиламмони (DHDAS), үүнд гидрофоб амин SO 3 - бүлэг, катион солилцох чадвартай. Өөрчлөлтийн уусмалыг дамжуулсны дараа l = 260 нм-ийн шингээлт нь 6.4 оптик нягтын нэгжид (°E) хүрч, өндөрлөгт хүрэв. Тооцоолсон ион солилцооны хүчин чадал нь 15.65 мкмоль. Газрын шүлтлэг элемент ба магнийн катионууд нь спектрийн хэт ягаан туяаны бүсэд шингэдэггүй тул хэт ягаан туяаг шууд бусаар илрүүлэх аргыг нийлэгжүүлсэн хэт ягаан туяаг шингээгч 1,4-дипиридиниумбутан бромид (DPB бромид) ашиглан ашигласан. Галоген ионууд баганын ган хэсгүүдийг устгадаг тул 1,4-дипиридиниумбутан бромидын ионыг ацетат ионоор сольсон. Уг баганыг элюентээр угаах үед хувиргагчийн эсрэг ион болох этилдиизопропиламмони нь хэт ягаан туяа шингээгч ион 1,4-дипиридиниумбутанаар солигдоно. Катионуудыг салгах ажлыг "эвхдэг хуваарь" горимд 0.4 А масштабаар l = 260 нм долгионы хамгийн оновчтой урттай хийсэн; Дуу хураагуурын туйл нь эсрэгээрээ байсан. Судалгаанд хамрагдсан бүх катионуудыг салгахад нарийн төвөгтэй нэмэлт болох оксалийн хүчил нэмсэнээр хүрсэн. Mg 2+, Ca 2+, Sr 2+, Ba 2+ илрүүлэх хязгаар нь 8 мкг/л; 16 мкг/л; 34 мкг/л; 72 мкг/л тус тус. Сонгосон нөхцөлд крантны усыг шинжилж, Ca 2+ агууламж 10.6 + 1.9 мг-ион/л, Mg 2+ -2.5 + мг-ион/л байна. Нөхөн үржихүйн алдаа нь Ca 2+ -2.2%, Mg 2+ 1.4% -иас хэтрэхгүй байна.

Хүрээлэн буй орчин дахь кадми цогцолборын шинжилгээ

Биосфер дахь хүнд металлын шилжилтийн механизмыг судлахын тулд байгальд металлын оршин тогтнох химийн хэлбэрийн талаархи мэдээлэл шаардлагатай. Хамгийн хортой металлын нэг болох кадмигийн нэгдлүүдийг шинжлэхэд хүндрэлтэй байгаа нь эмзэг цогцолбор үүсгэдэгтэй холбоотой бөгөөд тэдгээрийг тусгаарлахыг оролдох үед байгалийн тэнцвэрт байдал алдагддаг. Энэхүү ажилд хөрс, ургамал дахь кадми нэгдлүүдийг судалсны дараа хандыг хроматографийн аргаар ялгаж, химийн шинжилгээний аргаар бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тодорхойлох аргачлалыг ашигласан. Энэхүү арга нь кадмигийн химийн хэлбэрийг тодорхойлох төдийгүй хүрээлэн буй орчны объектуудад тэдгээрийн өөрчлөлтийг хянах боломжийг олгосон.

Нүүрс ус ба полифенолын OH бүлгүүд (флавоноид орно), C=O, фосфатууд, NH 2, NO 2, SH бүлгүүд нь биосферийн объектуудад кадмитай зохицуулагддаг. Энэхүү судалгааны зорилгоор эдгээр ангиллын нэгдлүүдийг төлөөлсөн загвар лигандын багцыг эмхэтгэсэн. Загварын лигандуудын усанд уусдаг кадми давстай харилцан үйлчлэлийг хэт ягаан туяаны спектроскопи болон HPLC ашиглан судалсан.

Кадми нэгдлүүдийг тусгаарлахын тулд тусгайлан сонгосон (Cd-тэй цогцолбор үүсгэдэггүй) уусгагчаар хандлах аргыг ашигласан. Энэ нь кадмийг химийн ойролцоо аналог болох цайраас бусад бүх хүнд металлаас салгах боломжтой болгодог. Олж авсан хандны хроматограмм дахь кадми, цайр агуулсан дээд цэгүүдийг металлыг тэдгээрийн дитизонат хэлбэрээр холбох замаар илрүүлсэн. Цайраас салгахын тулд рН 6-8 дахь Cd ба Zn цогцолборын тогтвортой байдлын зөрүүг ашигласан. Тусгаарлагдсан Cd нэгдлүүдийг HPLC-ээр ялгах явцад рН-ийн өөрчлөлтийг ашиглан тодорхойлсон. Хөрс, ургамлын эд эсийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдтэй кадмийн нэгдлүүдийн шинжилгээг хийж, хөрсний кадми нэмэгдсэний хариуд ургамлаас гаргаж авсан бодисыг тодорхойлсон. Флавоноидууд, ялангуяа трицин нь үр тарианы хамгаалалтын бодис, буурцагт ургамал дахь цистеины алкокси дериватив, мөн загалмайлсан ногооны полифенол ба тиол хоёулаа хамгаалалтын бодис болох нь батлагдсан.

БҮЛЭГ 4. HPLC ТОНОГ ТӨХӨӨРӨМЖ

ACCELA ЦУВРАЛ

Шинэ ACCELA хэт өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматограф нь өргөн хүрээний урсгалын хурд, даралтын горимд ажиллах чадвартай бөгөөд ердийн баганууд дээр ердийн HPLC салгах, 2 микроноос бага сорбентийн тоосонцортой баганууд дээр маш хурдан бөгөөд үр ашигтай тусгаарлалтыг хангадаг. хэт өндөр даралтанд (1000 атм-аас дээш).

Энэхүү систем нь 1000 атм-аас дээш даралт үүсгэх чадвартай, ердөө 65 мкл хадгалах багтаамжтай квадрантын градиент насосыг багтаасан бөгөөд энэ нь хроматографийн өндөр хурдтай салгах боломжийг олгодог. Автомат дээж авагч ACCELA 30 секундын сорьцын тарилгын мөчлөгт ажиллах чадвартай бөгөөд тарилгын хамгийн өндөр давтагдах чадварыг хангана. Диодын массив илрүүлэгч Accela PDAӨндөр хурдны хроматографийн хувьд оновчтой болгосон хамгийн бага урсгалтай эсийн эзэлхүүнтэй (2 мкл) нь патентлагдсан LightPipe технологийг ашигладаг бөгөөд өөгүй хроматографийн систем болон баганатай хамт ирдэг тэгш хэмтэй оргил хэлбэрийг хадгалдаг.

Энэхүү систем нь масс спектрометртэй харилцан уялдаатай бөгөөд дэлхийн хамгийн хүчирхэг, шилдэг LC/MS системийг бий болгодог.

1.9 μм UHP багануудыг Thermo Electron-аас ямар ч хэрэглээнд ашиглах боломжтой

TSP ЦУВРАЛ

HPLC багажийг бүтээх модульчлагдсан зарчим нь үйлчлүүлэгчид аливаа аналитик асуудлыг шийдвэрлэхийн тулд тоног төхөөрөмжийг уян хатан байдлаар угсрах боломжийг олгодог бөгөөд хэрэв тэдгээр нь өөрчлөгдвөл хурдан бөгөөд эдийн засгийн хувьд өөрчлөх боломжтой. Модулуудын өргөн сонголт нь изократаас дөрвөн бүрэлдэхүүн хэсэгтэй градиент хүртэл, бичил баганаас хагас бэлтгэл хүртэл, боломжтой бүх детектор, дээж нэвтрүүлэх системүүд - гарын авлагын форсункаас дээжийг ямар ч аргаар удирдах боломжтой авто дээж авагч хүртэл, хэмжилт боловсруулах хүчирхэг программ хангамжийг багтаасан болно. үр дүн болон системийн бүх модулиудыг удирдах. Бүх модулиуд нь CSA, TUF/GS, FCC(EMI), VDE (EMI), ISO-9000 сертификаттай, авсаархан, орчин үеийн загвартай, ажиллахад хялбар, суурилуулсан дэлгэц, өөрийгөө оношлох боломжтой. систем, даалгаврын аргуудыг үүсгэх, хадгалах боломжийг танд олгоно.параметр. Эдгээр нь "Үлгэр жишээ лабораторийн практик" (GLP) шалгуурыг хангаж, ОХУ-ын хэмжих хэрэгслийн бүртгэлд орсон болно. Хэмжилтийн тайланг Англи, АНУ, Герман, Францын фармакопейн дагуу гаргадаг.

TSP модульчлагдсан системүүд нь хамгийн найдвартай, тогтвортой ажиллагаатай байдаг.

Модулиудын хослол нь нэг талаас нэгдсэн системийн бүх давуу талыг, нөгөө талаас модульчлагдсан системийн уян хатан байдлыг аналитикчдад олгодог. Өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографийн (HPLC) хэрэглээний аль ч салбарт - фармакологи, биотехнологи, хүрээлэн буй орчны шинжилгээ, клиник шинжилгээ,

Дотор агаар: хяналт, цэвэршүүлэх арга. Хортой бодисын эх үүсвэр, хүрээлэн буй орчны хяналт. Хийн анализатор: хийн хольцын найрлагыг хянах хэрэглээ ба тэдгээрийн орчин үеийн төрлүүд - бүх нийтийн фотометрийн шингэн ба соронзон хальс.

Хяналт нь хүрээлэн буй орчныг ажиглах, хянах систем юм. Байгаль орчны объект дахь бохирдуулагчийг хянах арга.

Нэг баганын ионы хроматографийн аргаар анионуудыг салгах. Ион солилцооны давирхайн бөөмийн бүтцийн зураг. Хүрээлэн буй орчны объектын шинжилгээнд ион солилцооны хроматографийг ашиглах жишээ. Ионы хроматографи ашиглан шар айрагны шинжилгээний онцлог.

Хлорорганик нэгдлүүдийн ерөнхий шинж чанар, тэдгээрийн физик, химийн үндсэн шинж чанар, хэрэглэх талбай, байгаль орчин, амьтан, загас, хүний биед үзүүлэх сөрөг нөлөө. Хүнсний бүтээгдэхүүн дэх хлорорганик пестицид, тэдгээрийг тодорхойлох арга.

Хавтгай (нимгэн давхарга) хроматографийн үндэс: ус, хоол хүнс, тэжээл, тамхины бүтээгдэхүүн дэх пестицид, хлорорганик пестицидийг нимгэн давхаргын хроматографийн аргаар шинжлэхэд орчин үеийн багажийн аргуудыг ашиглах төлөв байдал, хэтийн төлөв.

Шинжилгээнд зориулж доторх агаарын дээжийг цуглуулах боломжтой аргууд. Колориметрийн хоолойн ажиллах зарчим. Тухайн урвалж нь тодорхой бохирдуулагчтай холбогдох үед өнгө өөрчлөгдөх. Дэгдэмхий органик нэгдлүүдийг илрүүлэх.

Флометрийн онолын үндэс (люминесценц), хүрээлэн буй орчны объектын шинжилгээнд ашиглах чиглэл, судалгааны орчин үеийн тоног төхөөрөмж. Люминесценцийн шинжилгээний ер бусын мэдрэмж ба хурд. Өдөөлтийн эрчим хүчний хангамжийн асуудал.

Химийн аналитик төхөөрөмжийг хөгжүүлэх нь гүйцэтгэсэн хэмжилтийн чанарын асуудлыг арилгах төдийгүй, эсрэгээр хэмжилтийн бүх тал дээр улам бүр өндөр шаардлага тавьж байна.

Үйлдвэрийн байгууламжийн талаархи ерөнхий мэдээлэл. Цаг уурын нөхцөлдүүрэг. Технологийн хэлхээ. Байгаль орчныг бохирдуулах, сүйтгэх эх үүсвэрүүд. Байгалийн усны бохирдол. Гадаргын усны чанарын ажиглалтын цэгүүд. Усны дээж авах, шинжилгээний арга.

Хүний эдийн засгийн үйл ажиллагааны явцад хүрээлэн буй орчинд олон төрлийн органик нэгдлүүд нэвтэрч байгаа нь эдгээр бодисууд нь гидросферийн техноген бохирдлын мөн чанарыг тодорхойлдог гол бохирдуулагчид болоход хүргэдэг.

Шинжилгээний спектроскопийн аргын шинж чанар. Олборлолт-фотометрийн аргын мөн чанар. Байгалийн усан дахь хүнд металлыг тодорхойлох аргыг ашиглах жишээ. Бромид ион ба нитратын ионыг тодорхойлох арга. Орчин үеийн тоног төхөөрөмж.

Хийн хроматографийн тухай ойлголт, зорилго, түүний хадгалалтын параметрүүд. Хадгалах хугацаа ба хадгалах хэмжээ. Хийн хроматографийн тэгшитгэл. Хийн хроматографийн нэмэлт төхөөрөмж. Онцгой байдлын үед агаарын бохирдлын хяналт.

Масс спектрометрийн аргын тухай ойлголт ба шинж чанарууд. Индуктив хосолсон плазмын масс спектрометр дэх давхар фокустай масс спектрометр. Хроматографи-масс спектрометрийг хүрээлэн буй орчны бохирдуулагч бодисыг тодорхойлоход ашиглах, тоног төхөөрөмж.

Хийн урсгалын бохирдлыг үнэлэх арга. Хийн дээж авах, дүн шинжилгээ хийх, хэмжих аргад тавигдах үндсэн шаардлага. Параметрийн бохирдлыг үнэлэх арга. Усны орчин, хөрс, хөрс, ургамлын бохирдлыг үнэлэх арга. Өөрчлөлтийг тодорхойлох.

Спектрофотометр, фотоколориметр, колориметрийн шингээлтийн аргыг ашиглан цэвэр металл дахь бодисын агууламжийн мянган хувийг оптик шинжилгээний аргаар тодорхойлох. Вэбсайтаар дамжуулан химийн шинжилгээний тоног төхөөрөмжийн худалдаа.

Кондуктометрийн шинжилгээний аргуудыг хэрэгжүүлэх зорилго, үндсэн зарчим. Ашигласан аргын төрлүүд, тэдгээрийн хэрэглээний онцлогууд. Хүрээлэн буй орчны объектын шинжилгээнд кондуктометрийг ашиглах жишээ, үүнд шаардлагатай тоног төхөөрөмж.

Байгалийн устай холбоотойгоор нүүрсустөрөгчийг (CH) антропоген болон байгалийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд хуваах, тоон тодорхойлох асуудлыг авч үздэг.

Ус цэвэршүүлэх сорбцийн аргыг одоо улам бүр ашиглаж байгаа бөгөөд хамгийн түгээмэл хэрэглэгддэг сорбентуудын нэг бол идэвхжүүлсэн нүүрс юм.

Хроматографийн үндсэн төрлүүд. Байгаль орчны хяналтад хроматографийн аргыг хэрэглэх. Хүрээлэн буй орчны объектын шинжилгээнд хроматографийн хэрэглээ. Орчин үеийн техник хангамжийн дизайн. Хроматограф боловсруулах арга, хроматографын ажиллагаа.

Физик-химийн аргаар байгалийн усыг хянах: хавтгай (нимгэн давхаргын хроматографи) ба усны шинжилгээнд хэрэглэх. Сорбент ба уусгагчийн хавтгай давхарга дахь бодисын хольцыг салгах. Флюориметр дээрх нефтийн бүтээгдэхүүний гэрэлтэлтийн эрчим.

“Байгалийн болон бохир усны бохирдуулагч бодисын өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматограф”

Оршил

Бүлэг 1. Шингэн хроматографийн аргын үндсэн ойлголт ба ангилал

1.1 Шингэн хроматографийн төхөөрөмж

Бүлэг 2. HPLC-ийн мөн чанар

2.1 Өргөдөл

Бүлэг 3. Байгаль орчны объектын шинжилгээнд HPLC ашиглах жишээ

Бүлэг 4. HPLC төхөөрөмж

Уран зохиол

Өргөдөл

Оршил

Хроматографийн аргуудижил төстэй бүтэцтэй органик бодисыг тодорхойлох, хэмжихэд зайлшгүй шаардлагатай байдаг. Гэсэн хэдий ч хамгийн өргөн хэрэглэгддэг ердийн туршилтуудхүрээлэн буй орчны бохирдуулагчид нь хий, өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматограф юм. Ундны болон бохир усны органик бохирдуулагчийн хийн хроматографийн шинжилгээг анх савласан багана ашиглан хийж байсан бол хожим нь кварцын хялгасан багана өргөн тархсан. Капилляр баганын дотоод диаметр нь ихэвчлэн 0.20-0.75 мм, урт нь 30-105 м байдаг.Усан дахь бохирдуулагч бодисыг шинжлэхэд хамгийн оновчтой үр дүнд фенил бүлгийн 5-ын агууламжтай метил фенил силиконуудын янз бүрийн зузаантай капилляр багануудыг ашиглах үед ихэвчлэн хүрдэг. ба 50%. Сул цэгКапилляр баганыг ашиглан хроматографийн аргууд нь ихэвчлэн дээжийг нэвтрүүлэх систем болдог. Загвар нэвтрүүлэх системийг бүх нийтийн болон сонгомол гэсэн хоёр бүлэгт хувааж болно. Бүх нийтийнх нь хуваах, задлахгүй шахах систем, баганад "хүйтэн" шахах, температурын программчлалаар ууршуулах зэрэг орно. Сонгомол оролтыг ашиглах үед хавханд завсрын барьж цэвэрлэх, толгойн зайны шинжилгээ гэх мэт. Бүх нийтийн тарилгын системийг ашиглах үед дээжийг бүхэлд нь баганад оруулдаг бөгөөд сонгомол тарилгын үед зөвхөн тодорхой хэсгийг л нэвтрүүлдэг. Сонгомол тарилгын тусламжтайгаар олж авсан үр дүн нь илүү нарийвчлалтай байдаг, учир нь баганад орж буй хэсэг нь зөвхөн дэгдэмхий бодис агуулдаг тул техникийг бүрэн автоматжуулах боломжтой.

БҮЛЭГ 1. ШИНГЭН ХРОМАТОГРАФИЙН АРГЫН ҮНДСЭН ОЙЛГОЛТ, АНГИЛАЛ

Шингэний хроматограф нь хөдөлгөөнгүй фазын зөөвөрлөгчийн төрлөөс хамааран хэд хэдэн ангилалд хуваагддаг. Цаасан болон нимгэн давхаргын хроматографийн энгийн багаж хэрэгсэл нь аналитик практикт эдгээр аргуудыг өргөнөөр ашиглахад хүргэсэн. Гэсэн хэдий ч баганын шингэн хроматографийн асар их чадавхи нь үүнд зориулсан тоног төхөөрөмжийг сайжруулахад түлхэц болсон сонгодог аргамөн HPLC-ийг хурдан нэвтрүүлэхэд хүргэсэн. Өндөр даралтын дор баганаар дамжуулагч бодисыг нэвтрүүлэх нь нарийн тархсан сорбентыг ашигласнаар шинжилгээний хурдыг эрс нэмэгдүүлж, салгах үр ашгийг мэдэгдэхүйц нэмэгдүүлэх боломжтой болсон. HPLC арга нь одоогоор органик нэгдлүүдийн цогц хольцыг тусгаарлах, тоон болон чанарын шинжилгээ хийх боломжийг олгодог.

Цагаан будаа. 1. Адсорбцийн шингэний хроматографи.

Цагаан будаа. 2. Залгасан фазтай хуваалтын хроматограф (хэвийн фазын сонголт).

Цагаан будаа. 3. Залгасан фазтай хуваалтын хроматограф (урвуу фазын сонголт).

Органик бус шинжилгээнд ион солилцоо, ион хос, лиганд солилцооны хроматографийг голчлон ашигладаг.

Хроматографийн ялгах үндсэн үзүүлэлтүүд.

Хадгалах хугацаа tR гэдэг нь дээжийг баганад оруулснаас хойш харгалзах оргилын дээд хэмжээ гарах хүртэл өнгөрсөн хугацаа юм. Хадгалах хугацааг F-ийн эзэлхүүний хурдаар үржүүлснээр бид VR хадгалах эзэлхүүнийг олж авна.

tR" = tR - t0 ;

VR" = VR - V0;

k" утгыг хроматограммаас хялбархан тодорхойлж болно.

Хроматографийн ялгах хамгийн чухал үзүүлэлтүүд нь түүний үр ашиг ба сонгомол чанар юм.

N = 5.54. (tR / 1/2) 2 ,

Хаана tR- хадгалах хугацаа,

w 1/2 - хагас өндөрт оргил өргөн

HETT = L/N PVET = HETT/d c

Хоёр бодисыг ялгах сонгомол байдлыг тэгшитгэлээр тодорхойлно.

Хоёр бүрэлдэхүүн хэсгийн хольцыг салгах талаар авч үзэхэд RS тусгаарлах зэрэг нь бас чухал үзүүлэлт юм.

;

RS утга нь 1.5-аас их буюу тэнцүү байвал оргил цэгүүдийг шийдсэн гэж үзнэ.

Хроматографийн үндсэн параметрүүд нь дараахь тэгшитгэлээр тодорхойлогддог.

;

Тусгаарлалтын сонгомол байдлыг тодорхойлдог хүчин зүйлүүд нь:

1) сорбентын химийн шинж чанар;

2) уусгагч ба түүний хувиргагчийн найрлага;

3) ялгаж буй хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн химийн бүтэц, шинж чанар;

4) баганын температур

1.1 Шингэн хроматографийн төхөөрөмж

Орчин үеийн шингэн хроматографи нь төхөөрөмжүүдийг ашигладаг янз бүрийн зэрэгнарийн төвөгтэй байдал - хамгийн энгийн системээс эхлээд янз бүрийн нэмэлт төхөөрөмжөөр тоноглогдсон дээд зэргийн хроматограф хүртэл.

Цагаан будаа. 4. Шингэн хроматографын блок диаграмм.

Инжектор (3) нь ялгаж буй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хольцын дээжийг нэлээд өндөр давтагдах чадвартай баганад оруулахыг баталгаажуулдаг. Энгийн "зогсоох урсгал" сорьцын тарилгын систем нь насосыг зогсоохыг шаарддаг тул Reodyne-ийн боловсруулсан гогцоо сорууртай харьцуулахад тийм ч тохиромжтой биш юм.

Байгаль орчны бохирдуулагчийн шинжилгээнд ихэвчлэн ашиглагддаг HPLC баганууд нь 25 см урт, 4.6 мм дотоод диаметртэй, октадецилийн бүлгүүдээр залгагдсан 5-10 мкм хэмжээтэй бөмбөрцөг цахиурт гель хэсгүүдээр савлагдсан байдаг. Сүүлийн жилүүдэд жижиг хэсгүүдээр дүүрсэн жижиг дотоод диаметр бүхий баганууд боломжтой болсон. Ийм баганыг ашиглах нь уусгагчийн хэрэглээ, шинжилгээний хугацааг багасгах, мэдрэмж, салгах үр ашгийг нэмэгдүүлэх, мөн баганыг спектрийн мэдрэгчтэй холбох асуудлыг хялбаршуулдаг. 3.1 мм-ийн дотоод диаметр бүхий багана нь ашиглалтын хугацааг уртасгах, аналитик давтагдах чадварыг сайжруулах зорилгоор хамгаалалтын хайрцаг (урьдчилсан багана) -аар тоноглогдсон.

дотор гэдгийг санах нь зүйтэй практик ажилТусгаарлах нь ихэвчлэн нэг замаар биш, хэд хэдэн механизмаар нэгэн зэрэг явагддаг. Иймээс гадуурхах тусгаарлалт нь шингээлтийн нөлөөгөөр, шингээлтийн тусгаарлалт нь тархалтын нөлөөгөөр, мөн эсрэгээр хүндрэлтэй байж болно. Түүгээр ч зогсохгүй дээжинд агуулагдах бодисуудын иончлолын зэрэг, суурьшил, хүчиллэг байдал, молекулын жин, туйлшрах чадвар болон бусад үзүүлэлтүүдийн ялгаа их байх тусам эдгээр бодисыг ялгах өөр механизм үүсэх магадлал өндөр болно.

Дэлхийн ихэнх лабораторид тэргүүлэх ач холбогдол бүхий 16 PAH-ийн бүлэгт HPLC эсвэл CMS шинжилгээ хийдэг.

БҮЛЭГ 2. HPLC-ийн мөн чанар

HPLC-д цэвэр уусгагч эсвэл тэдгээрийн хольцыг ихэвчлэн хөдөлгөөнт фаз болгон ашигладаг.

HPLC-ийн онцлог шинж чанартай өндөр даралтанд савлах, ашиглахыг зөвшөөрдөггүй механик хүч чадал хангалтгүй;

HPLC-д зориулсан илрүүлэгч

Илрүүлэгч:

2.1 Өргөдөл

· Хүнсний чанарын хяналт - тоник болон амт оруулагч нэмэлт, альдегид, кетон, витамин, сахар, будагч бодис, хадгалалтын бодис, дааврын эм, антибиотик, триазин, карбамат болон бусад пестицид, микотоксин, нитрозамин, полициклик үнэрт нүүрсустөрөгч гэх мэт.

· Байгаль орчныг хамгаалах - фенол, органик нитро нэгдлүүд, моно- болон полициклик үнэрт нүүрсустөрөгчид, олон тооны пестицид, үндсэн анион, катионууд.

· Шүүхийн шинжилгээ - эм, органик тэсрэх бодис, будагч бодис, хүчтэй эм бэлдмэл.

· Эмийн үйлдвэр - стероид гормонууд, органик синтезийн бараг бүх бүтээгдэхүүн, антибиотик, полимер бэлдмэл, витамин, уургийн бэлдмэл.

· Анагаах ухаан - өвчнийг оношлох, ялгаралтын хурдыг тодорхойлох, биологийн шингэн дэх биохимийн болон эмийн бодис, тэдгээрийн метаболит (амин хүчил, пурин ба пиримидин, стероид гормон, липид) эмбие даасан тунгийн зорилгоор биеэс.

· Хөдөө аж ахуй-хөрсөн дэх нитрат, фосфатын хэмжээг тодорхойлох, шаардлагатай бордооны хэмжээг тодорхойлох, тэжээлийн (амин хүчил, витамин) тэжээллэг чанарыг тодорхойлох, хөрс, ус, хөдөө аж ахуйн бүтээгдэхүүн дэх пестицидийн шинжилгээ.

· Биохими, биоорганик хими, генийн инженерчлэл, биотехнологи - сахар, липид, стероид, уураг, амин хүчил, нуклеозид ба тэдгээрийн дериватив, витамин, пептид, олигонуклеотид, порфирин гэх мэт.

· Органик хими - органик синтезийн бүх тогтвортой бүтээгдэхүүн, будагч бодис, термолабиль нэгдлүүд, дэгдэмхий бус нэгдлүүд; органик бус хими (ионы хэлбэрээр бараг бүх уусдаг нэгдлүүд ба нарийн төвөгтэй нэгдлүүд).

· Хүнсний бүтээгдэхүүн, согтууруулах ундаа, согтууруулах ундаа, ундны ус, ахуйн химийн бодис, үнэртэй ус үйлдвэрлэх бүх үе шатанд чанар, аюулгүй байдалд хяналт тавих;

· хүний үйл ажиллагаанаас үүдэлтэй гамшиг, онцгой байдлын голомт дахь бохирдлын шинж чанарыг тодорхойлох;

· мансууруулах, хүчтэй, хортой болон тэсрэх бодис;

· аж ахуйн нэгж, амьд организмын шингэн хаягдал, агаарт ялгарах болон хатуу хог хаягдал дахь хортой бодис (полициклик болон бусад үнэрт нүүрсустөрөгч, фенол, пестицид, органик будагч бодис, хүнд, шүлт, шүлтлэг шороон металлын ион) байгаа эсэхийг тодорхойлох;

· органик синтез, газрын тос, нүүрс боловсруулах, биохими, микробиологийн үйлдвэрлэлийн үйл явцыг хянах;

БҮЛЭГ 3. БАЙГАЛЬ ОРЧНЫ ОБЪЕКТИЙН ШИНЖИЛГЭЭД HPLC АШИГЛАХ ЖИШЭЭ.

HPLC нь хүрээлэн буй орчны объектуудын PAH-ийг хянах арга юм

Полициклийн хувьд үнэрт нүүрсустөрөгчидАюулын 1-р ангиллын эко хор (PAHs), байгалийн объектуудад зөвшөөрөгдөх дээд концентрацийн (MPC) маш бага түвшин тогтоогдсон. MPC болон түүнээс доош түвшинд PAH-ийг тодорхойлох нь аналитикийн хамгийн төвөгтэй асуудлуудын нэг бөгөөд тэдгээрийг шийдвэрлэхийн тулд өндөр технологийн аналитик аргуудыг (GC-MS, GC, HPLC) ашигладаг. Хяналтын аргыг сонгохдоо үндсэн шинж чанаруудад мэдрэмж ба сонгомол байдал, хурд, үр ашгийг нэмж оруулсан болно. мониторинг нь цуврал шинжилгээг хамардаг. Богино, жижиг диаметртэй багана дээрх HPLC сонголт нь эдгээр шаардлагыг бүрэн хангадаг. Энэхүү аргыг ашиглан зохиогчид аэрозол, цасан бүрхүүл, гадаргын ус гэсэн гурван байгалийн орчинд бензо[а]пиренийг хянах аргыг боловсруулж, баталгаажуулсан. Арга нь: энгийн стандартчилсан дээж бэлтгэх, үүнд PAH-ийг органик уусгагчаар гаргаж авах, хандны концентраци, баяжуулсан хандыг хроматографийн баганад шууд оруулах, спектрийн хэт ягаан туяаны бүсэд олон долгионы урттай фотометрийн илрүүлэлтийг ашиглах зэргээр тодорхойлогддог. , хадгалах хугацаа болон спектрийн харьцаа гэсэн хоёр параметрийг ашиглан хроматограмм дахь PAH оргилуудыг тодорхойлох. Аэрозоль дахь бензо[а]пиренийг 0.3-аас 450 нг/м3, гадаргын усанд 10-1000 нг/л, цасан бүрхүүлд агуулагдах агууламжийг тодорхойлоход нийт алдаа 10%-иас хэтрэхгүй байна. гадаргуугийн нягт 0.5-аас 50 мкг / м2 хүртэл. Нэн тэргүүний PAH-ийг (12 хүртэл нэгдлүүдийг) нэгэн зэрэг тодорхойлох, аналитикийн нэгэн төрлийн бус оргилуудыг бүртгэх тохиолдолд хөдөлгөөнт фазын сонгомол байдал, илрүүлэх долгионы урт, баганын температурыг харгалзан хандыг давтан тусгаарлахыг санал болгосон. бие даасан шинж чанаруудтодорхойлсон PAH.

Анилины 0.01 М усан уусмалаас 200С-ийн янз бүрийн сорбентоор анилиныг шингээх.

Байгаль орчны объектуудын PAH-ийг тодорхойлох арга

Шинжилгээг хялбарчлах, мөн өндөр чанартай үр дүнд хүрэхийн тулд ихэнх аналитик процедур нь дээж дэх холбогдох нэгдлүүдийн бусад бүлгээс PAH-ийг урьдчилан тусгаарлах (салгах) үе шатыг агуулдаг. Ихэнх тохиолдолд шингэн-хатуу эсвэл шингэн-шингэн системд шингээх механизм, жишээлбэл цахиурын гель эсвэл хөнгөн цагааны исэл, заримдаа холимог механизм, жишээлбэл Sephadex ашиглан шингээх, хасах гэх мэт бага даралтын шингэн хроматографийн аргыг эдгээр зорилгоор ашигладаг.

Дээжийг урьдчилан цэвэрлэх аргыг ашиглах нь дараахь нөлөөллөөс зайлсхийх боломжийг олгодог.

Алифат нүүрсустөрөгч зэрэг бүрэн туйлшралгүй нэгдлүүд;

Дунд зэргийн болон хүчтэй туйлын нэгдлүүд, жишээлбэл, фталан, фенол, олон атомт спирт, хүчил;

Давирхай зэрэг өндөр молекул жинтэй нэгдлүүд.

Туршилтын дээжинд тодорхойлсон агууламжийн түвшин;

Холбогдох бодисын тоо;

Ашигласан аналитик процедур (хэмжилтийн техник);

Цуваа тоног төхөөрөмжийн хүчин чадал.

Хүрээлэн буй орчин дахь кадми цогцолборын шинжилгээ

БҮЛЭГ 4. HPLC ТОНОГ ТӨХӨӨРӨМЖ

ЦУВРАЛ ACCELA

1.9 μм UHP багануудыг Thermo Electron-аас ямар ч хэрэглээнд ашиглах боломжтой

ЦУВРАЛ TSP

TSP модульчлагдсан системүүд нь хамгийн найдвартай, тогтвортой ажиллагаатай байдаг.

Модулиудын хослол нь нэг талаас нэгдсэн системийн бүх давуу талыг, нөгөө талаас модульчлагдсан системийн уян хатан байдлыг аналитикчдад олгодог. Эмийн бүтээгдэхүүн, биотехнологи, хүрээлэн буй орчны шинжилгээ, эмнэлзүйн шинжилгээ, хоол хүнс, ундааны шинжилгээ, нефтийн химийн болон химийн шинжилгээ зэрэг өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматографийн (HPLC) ямар ч хэрэглээнд энэ багаж нь хамгийн өндөр шаардлагад нийцүүлэн оновчтой тохируулагдсан байдаг.

Судалгааны болон өндөр бүтээмжтэй ердийн системүүдийн аль аль нь:

Өндөр үр ашигтай уусгагчаар хий тайлах

Жижиг, хэт жижиг дээжтэй ажиллах чадвартай

Хэт ягаан туяаны/VIS мэдрэгч ба диодын массивын аль алинд нь хамгийн өндөр мэдрэмжтэй (1 эсвэл 5 см оптик замын урттай алдартай LightPipe технологитой)

Өөр өөр баганатай ажиллах

Хамгийн өндөр нарийвчлалтай тоон шинжилгээ

Янз бүрийн дээжийн эзэлхүүнтэй автоматаар ажиллах чадвар

Хадгалах хугацааны RMS алдаа 0.3%-иас бага

Системийн эзэлдэг хамгийн бага ажлын талбай

Параметрүүдийн хамгийн өндөр найдвартай байдал, тогтвортой байдал.

Surveyor LC насос- Дэлхийд байдаг дөрвөн бүрэлдэхүүн хэсэгтэй градиент насосуудаас хамгийн сайн хадгалах хугацаатай HPLC насос. Дөрвөн сувгийн нэгдсэн вакуум хий сааруулагч ба импульсийн сааруулагч нь хамгийн дээд мэдрэмж, хэмжигдэхүүнийг нарийвчлалтай байлгахын тулд маш сайн суурь тогтвортой байдлыг хангадаг.

Автомат дээж авагч нь хамгийн өндөр бүтээмж, шинжилгээний уян хатан байдлыг хангадаг. Стандарт шилнээс эхлээд 96 ба 384 цооногтой микроплита хүртэл өргөн хүрээний дээжийн тавиурууд нь бараг бүх хэрэглээний хэрэгцээг хангадаг. Шинэ технологидээжийг бараг ямар ч алдагдалгүйгээр шахах боломжийг олгодог бөгөөд 5 мкл дээжийн нийт эзэлхүүнээс бараг 5 мкл дээжийг автомат дээжээр тарина.

СУДАЛГААГЧ

Хэт ягаан туяа/Vis мэдрэгч ба PDA (диодын массив илрүүлэгч)

Surveyor UV/Vis- Хувьсах долгионы урттай хэт ягаан туяа болон үзэгдэх гэрлийн мэдрэгч нь LightPipe технологийн хамгийн өндөр мэдрэмжтэй өртөг хэмнэлт, найдвартай байдлын хослол юм. Урсгалын эсийн өргөн сонголт нь энэ детекторыг капилляр эсвэл бичил баганын хроматографаас эхлээд хагас бэлдмэл, бэлдмэл гэх мэт бүх төрлийн хэрэглээнд ашиглах боломжтой болгодог.

Сурвалжлагч PDAДетектор нь диодын массив ашигладаг HPLC детекторуудаас хамгийн мэдрэмтгий нь юм. Хос гэрлийн эх үүсвэрийн оптик нь 190-аас 800 нм хүртэлх долгионы уртыг бүхэлд нь хамардаг. Шилэн кабелийн цацраг үүсгэгч нь мэдрэмтгий байдлыг алдагдуулахгүйгээр маш сайн оптик нягтралыг өгдөг.

Сурвалжлагч Р.И.Компьютерээс бүрэн цахим удирдлагатай, хамгийн бага эзэлхүүнтэй термостаттай кювет бүхий рефрактометрийн детектор.

Судалгааны мэргэжилтэн Ф.ЛФлюресценц, хемилюминесценц, фосфоресценцийг илрүүлэх хамгийн өндөр мэдрэмжтэй, флюориметрийн сканнерийн детектор.

Автомат дээж авагчийн өргөн сонголт нь биохими, эмнэлзүйн практикт өргөн хэрэглэгддэг ердийн хуруу шил болон 96 байрлалтай ялтсуудтай ажиллах боломжийг олгодог. Тэдэнтэй ажиллах нь хатуу фазын хандыг ашиглан дээж бэлтгэхэд ижил төстэй ялтсуудыг ашиглах замаар хөнгөвчилдөг.

400 цахилгаан хөтөч, хэсэгчлэн дүүргэх чадвартай Valco гогцоо (20 мкл - стандарт).

Карусель 96 дээж.

Цахилгаан хөтөч, баганын термостат, хэсэгчлэн дүүргэх боломжтой Valco гогцоо (100 мкл - стандарт) Дээж бэлтгэх AutoMix горим. Дээж тойруулан: 84 x 2 мл (дээж) + 3 x 10 мл (урвалж). Баригдсан баганын термостат. 420

Автомат дээж авах давталт судалгааны ажилбүрэн, хэсэгчлэн дүүргэх, микролитр сорьц тарих горимд ажиллах чадвартай. Тойрогуудын өргөн сонголт (стандарт - 96 дээж).

96 ба 384 байрлалтай хавтантай ажиллахад зориулсан таблетын автомат дээж авагч. Даралтын дор гогцоонд дээжийг шахах, 1 мкл-ээс бага дээжийг шахах чадвар. Таблет тэжээгч суурилуулах боломж. HPLC

HPLC тоног төхөөрөмжийн томоохон үйлдвэрлэгчид

· Ус - хэт гүйцэтгэлийн хроматографи, масс спектрометр, багана, хатуу фазын олборлолт;

Varian, Inc. - хроматограф ба багана, хатуу фазын олборлолтод зориулсан хэрэгслүүд;

· Agilent Technologies - хроматограф ба багана;

· Hypersil - багана ба сорбент.

· Merck KGaA - TLC хавтан ба нэмэлт хэрэгсэл, багана, сорбент, HPLC-ийн хөдөлгөөнт фаз, хатуу фазын олборлолтод зориулсан хэрэгслүүд

· Dionex - HPLC, ялангуяа ионы хроматографийн төхөөрөмж, багана.

Уран зохиол

1. Пилипенко А.Т., Пятницкий И.В. Аналитик хими. Хоёр номонд: ном..1 - М.: Хими, 1990, -480 х.

1. Пилипенко А.Т., Пятницкий И.В. Аналитик хими. Хоёр номонд: ном..2 - М.: Хими, 1990, -480 х.

2. Васильев В.П. Аналитик хими. 14 цагт 2-р хэсэг. Физик - химийн аргууддүн шинжилгээ: Proc. Химкогийн хувьд - технологи. мэргэжилтэн. их дээд сургуулиуд - М .: Илүү өндөр. сургууль, 1989. – 384 х.

3. Гидрохимийн материал. Боть 100. Гадаргын усны чанарыг шуурхай хянах арга техникийн хэрэгсэл. Л.: Гидрометео-издат, 1991. – 200 х.

4. Лури Ю.Ю. Үйлдвэрийн хаягдал усны аналитик хими / Ю.Ю. Лури; М.: ХимияЮ, 1984. - 448 х.

5. Ewing G. Химийн шинжилгээний багажийн аргууд / Орч. англи хэлнээс М.: Мир, 1989. – 348 х.

6. Горелик Д.О., Конопелко Л.А., Панков Е.Д. Байгаль орчны хяналт. 2 боть. Санкт-Петербург: Зул сарын баяр. 2000. – 260 х.

7. Айвазов Б.В. Хроматографийн танилцуулга. М .: Илүү өндөр. сургууль, 1983. – 450 х.

8. Голдберг К.А., Вигдергауз М.С. Хийн хроматографийн танилцуулга. М.: Хими, 1990. – 329 х.

9. Столяров Б.В. ба бусад // Практик хий ба шингэний хроматографи. Санкт-Петербург: Санкт-Петербург улсын их сургууль, 1998. - P. 81.

11. Gorshkov A.G., Marinaite I.I. HPLC нь хүрээлэн буй орчны объектуудын PAH-ийг хянах арга юм

12. Торосян Г.О., Мартиросян В.А., Алексанян А.Р., Закарян М.О.. цувисан зэсийн масштабын алюминотермик бууралтаас үүссэн хаягдлыг ашиглан усан уусмалаас анилиныг зайлуулах.

13. Л.А. Туркина, Г.Н. Королева Ионы өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн тусламжтайгаар газрын шүлтлэг элемент ба магнийн хэмжээг тодорхойлох аргыг боловсруулах.

14. Дульцева Г.Г., Дубцова Ю.Ю., Скубневская Г.И. Хүрээлэн буй орчин дахь кадми цогцолборын шинжилгээ

Өргөдөл

УСАН ДАХЬ КЛОМАЗОНЫГ ХРОМАТОГРАФИК АРГААР ТОДОРХОЙЛОХ

АРГА ЗҮЙН ЗААВАР MUK 4.1.1415-03

1. Бэлтгэсэн: Холбооны эрүүл ахуйн шинжлэх ухааны төв. Ф.Ф.

Эрисман; Москвагийн Хөдөө аж ахуйн академи. К.А.

Тимирязев; ОХУ-ын Эрүүл мэндийн яамны Улсын ариун цэврийн болон эпидемиологийн хяналтын газрын оролцоотойгоор. Аргачлалын хөгжүүлэгчид төгсгөлд жагсаав.

3. Улсын ариун цэврийн ерөнхий эмчээр батлав

Оросын Холбооны Улс, ОХУ-ын Эрүүл мэндийн сайдын нэгдүгээр орлогч, академич. RAMS G.G. Онищенко 2003 оны 6-р сарын 24

5. Анх удаа танилцуулж байна.

1. Оршил хэсэг

Үйлдвэрлэгч: FMS (АНУ).

Худалдааны нэр: COMMAND.

Идэвхтэй бодис: кломазон.

2-(2-хлорбензил)-4,4-диметил-3-изоксалидин-3-нэг(IUPAC)

Цайвар хүрэн наалдамхай шингэн.

Хайлах цэг: 25 -С.

Буцлах цэг: 275 -С.

25 -С температурт уурын даралт: 19.2 МПа.

Хуваалтын коэффициент n-октанол/ус: K logP = 2.5.

Ацетон, гексан, этанол, метанолд маш сайн уусдаг.

хлороформ, дихлорометан ба ацетонитрил; усанд уусах чадвар -

1.10 г/ку.м. dm. Өрөөний температурт 2-оос доошгүй жил, 50 -С-т 3 сараас доошгүй хугацаанд тогтвортой байна.

Товч хор судлалын шинж чанар: Цочмог аман

харханд хоруу чанар (LD) - 1369 - 2077 мг / кг; цочмог арьсны

харханд хоруу чанар (LD) - 2000 мг / кг-аас их; цочмог

харханд амьсгалах хордлого (LC) - 4.8 мг/м3. dm (4 цаг).

Эрүүл ахуйн стандартууд. Усан дахь концентрацийн дээд хязгаар нь 0.02 мг/м3 байна. dm.

Мансууруулах бодисын хэрэглээний талбар. Кломазон нь шар буурцаг, цагаан будааны үр тарианы хоёр талт хогийн ургамлыг ургуулахаас өмнөх болон тариалалтын өмнөх аргаар устгахад ашигладаг сонгомол гербицид юм.

2. Усан дахь кломазоныг тодорхойлох арга

хроматографийн аргууд

2.1. Үндсэн заалтууд

2.1.1. Техникийн зарчим

Энэхүү техник нь шинжлэгдсэн дээжээс кломазоныг гексанаар гаргаж авах, хандны концентраци, дараа нь өөр аргаар тоон тодорхойлоход суурилдаг.

нь өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (HPLC).

хэт ягаан туяаны детектор, тогтмол рекомбинацын хурд мэдрэгч бүхий хийн шингэн хроматограф (GLC) эсвэл нимгэн давхаргын хроматографи (TLC). Тоон тодорхойлолтыг үнэмлэхүй шалгалт тохируулгын аргаар гүйцэтгэдэг.

2.1.2. Аргын сонгомол байдал

Санал болгож буй нөхцөлд энэ арга нь дэлхийн байгаль орчны бохирдуулагчид: хлоржуулсан циклопарафин (HCCH изомерууд), дифенил нэгдлүүд (ДДТ ба түүний деривативууд), тэдгээрийн метаболитууд - полихлоржуулсан бензол ба фенолууд, түүнчлэн натрийн трихлорацетат байгаа тохиолдолд өвөрмөц юм. , үүнийг тариалангийн талбайд гербицид болгон ашиглаж болно.

2.1.3. Аргын хэмжилзүйн шинж чанар (P = 0.95)

Урвалж, уусмал, материал

Clomazone агуулсан d.v. 99.8%

(FMS, АНУ)

Азот, маш өндөр ГОСТ 9293-79

Усан аммиак, 25%, ц ГОСТ 1277-81

Ацетон, h ГОСТ 2603-79

n-Гексан, h ГОСТ 2603-79

Устөрөгчийн хэт исэл, 30% усан уусмал ГОСТ 10929-77

Изопропилийн спирт, химийн цэвэр TU 6-09-402-75

Хүхрийн хүчил, урвалжийн агуулга ГОСТ 4203-77

Давсны хүчил (давсны хүчил), урвалжийн зэрэг ГОСТ 3118-77

Метилийн спирт, урвалжийн зэрэглэлийн ГОСТ

Натрийн гидроксид, химийн цэвэр, 25% усан уусмал ГОСТ 4323-77

Усгүй натрийн сульфат, урвалжийн агуулга ГОСТ 1277-81

Мөнгөний нитрат, урвалжийн агуулга ГОСТ 1277-81

2-Феноксиметанол, хэсэг TU 6-09-3688-76

Chromaton N-AW-DMCS (0.16 - 0.20 мм)

5% -тай SE-30, Гемапол, Чех

Chromaton N-AW-DMCS (0.16 - 0.20 мм) нь 1.5

OV-17 + 1.95% QF-1, Гемапол, Чех

HPTLC-д зориулсан хавтан (ЗХУ)

"Kieselgel 60 F-254" хавтан (Герман)

Чех улсын "Силуфол" бичлэг

Цаасан шүүлтүүр "цагаан тууз", гексанаар угааж, урьдчилан угаасан TU 6-09-2678-77

2.3. Төхөөрөмж, тоног төхөөрөмж, аяга таваг

Шингэн хроматограф Миликром

хэт ягаан туяаны мэдрэгчтэй

Ган хроматографийн багана,

урт 64 мм, дотоод диаметр 2 мм,

Силасорб 600 дүүргэсэн, ширхэгийн хэмжээ 5 микрон

Хийн хроматограф цуврал "Өнгө" эсвэл

ижил төстэй, байнгын илрүүлэгчээр тоноглогдсон

хязгаартай рекомбинацийн хурд (RPR).

линданыг илрүүлэх 4 x 10 г/cc. см

Шилэн хроматографийн багана, урт

1 эсвэл 2 м, дотоод диаметр нь 2 - 3 мм

Микро тариурын төрөл MSh-10, багтаамж 10 мкл TU 5E2-833-024

AVU-6s TU 64-1-2851-78 төрлийн сэгсрэх аппарат

Усан банн TU 64-1-2850-76

VLA-200 төрлийн аналитик балансууд ГОСТ 34104-80Е

Хроматографийн камер ГОСТ 10565-74

Усны тийрэлтэт насос ГОСТ 10696-75

Мөнгөн ус-кварцын цацрагийн төрлийн OKN-11 TU 64-1-1618-77

Шилэн шүршигч сав ГОСТ 10391-74

Эргэдэг вакуум ууршуулагч IR-1M

эсвэл ижил төстэй TU 25-11-917-76

Компрессорын нэгж TU 64-1-2985-78

Хатаах кабинет TU 64-1-1411-76E

ГОСТ 3613-75 тусгаарлах юүлүүр

Эзлэхүүний колбо, багтаамж 100 мл ГОСТ 1770-74

Хэмжих цилиндр, багтаамж 10, 50 мл ГОСТ 1770-74Е

Нунтагласан хэсэгтэй лийр хэлбэртэй колбо,

100 мл-ийн багтаамжтай ГОСТ 10394-72

Конус колбо, багтаамж 100 мл ГОСТ 22524-77

ГОСТ 25336-82Е хэмжүүр бүхий центрифугийн хоолой

Пипетк, багтаамж 0.1, 1, 2, 5 ба 10 мл ГОСТ 20292-74

Химийн юүлүүр, конус, диаметр

34 - 40 мм ГОСТ 25336-82Е

2.4. Сонголт түүвэр

Дээж сонгох, хадгалах, бэлтгэх ажлыг дараахь дагуу явуулдаг

21.08.79-ны өдрийн 2051-79 тоотоор батлагдсан "Хөдөө аж ахуйн бүтээгдэхүүн, хүнсний бүтээгдэхүүн, хүрээлэн буй орчны объектуудаас дээж авах нэгдсэн журам" пестицидийн ул мөрийн хэмжээг тодорхойлох

Сонгосон дээжийг хөргөгчинд 5 хоногоос илүүгүй хугацаагаар хадгалж болно. Шинжилгээ хийхийн өмнө усыг (хэрэв түдгэлзүүлсэн бодис байгаа бол) сул цаасан шүүлтүүрээр шүүнэ.

2.5. Шийдвэр гаргахад бэлтгэж байна

2.5.1. HPLC арга

2.5.1.1. HPLC-ийн хөдөлгөөнт үе шатыг бэлтгэх

Пипеткээр 5 мл изопопанол, 5 мл метанолыг 100 мл хэмжээст колбонд хийж, тэмдэглэгээнд гексан нэмж, хольж, шүүнэ.

2.5.1.2. Баганын нөхцөл байдал

HPLC баганыг гексан-метанол-изопропанолоор (90:5:5, v/v) 30 минутын турш зайлж угаана. уусгагчийн урсгалын хурд 100 мкл/мин.

2.5.2. GLC арга. Баганыг бэлтгэх, агааржуулах

Бэлэн савлагааг (Chromaton N-AW-DMCS дээрх 5% SE-30) шилэн багананд цутгаж, вакуум дор нягтруулж, баганыг детектортой холбохгүйгээр хроматографийн термостатад суулгаж, азотын урсгалд тогтворжуулна. 10 - 12 цагийн турш 250 -С-ийн температур

2.5.3. TLC арга

2.5.3.1. Боловсруулж буй урвалж бэлтгэх

2.5.3.1.1. Боловсруулах урвалж №1

1 г мөнгөний нитратыг 1 мл нэрмэл усанд уусгаж, 10 мл 2-феноксиметанол, 190 мл ацетон, 1 - 2 дусал устөрөгчийн хэт исэл нэмж, уусмалыг хутгаж, харанхуй шилэн саванд хийнэ.

2.5.3.2.2. Боловсруулах урвалж N 2

0.5 г мөнгөний нитратыг 100 мл хэмжээст колбонд 5 мл нэрмэл усанд уусгаж, 10 мл 25% усан аммиак нэмж, уусмалыг ацетоноор 100 мл хүртэл тохируулж, хольж, харанхуй шилэн колбонд хийнэ.

2.5.3.2. TLC-ийн хөдөлгөөнт үе шатыг бэлтгэх

100 мл хэмжээст колбонд 20 мл ацетон нэмээд тэмдэглэгээнд гексан нэмээд холино. Хольцыг хроматографийн камерт 30 минутын дотор 6-8 мм-ээс ихгүй давхаргад хийнэ. Хроматографи эхлэхээс өмнө.

2.5.4. Стандарт уусмал бэлтгэх

100 мкг/мл агуулсан кломазоны нөөцийн стандарт уусмалыг 99.8% идэвхтэй бодис агуулсан 0.010 г эмийг 100 мл хэмжээст колбонд гександ уусгаж бэлтгэнэ. Уусмалыг нэг сарын турш хөргөгчинд хадгална.

0.4 концентрацитай ажлын стандарт уусмалууд; 1.0; 2.0; 4.0; 10.0; 20 ба 40.0 мкг/мл-ийг кломазоны нөөцийн стандарт уусмалаас гексанаар зохих цуваа шингэрүүлэлтээр бэлтгэнэ.

Ажлын уусмалыг хөргөгчинд нэг сараас илүүгүй хугацаанд хадгална.

2.5.5. Шалгалт тохируулгын график байгуулах

2.5.5.1. Шалгалт тохируулгын график А (2.7.1, HPLC-ийн дагуу хэмжилт хийх)

Шалгалт тохируулгын графикийг бий болгохын тулд хроматографын инжектор руу 4.0 концентрацитай кломазоны ажлын стандарт уусмалаас 5 мкл тарина; 10.0; 20.0 ба 40 мкг/мл.

2.5.5.2. Шалгалт тохируулгын график B (2.7.2, GLC-ийн дагуу хэмжилт хийх)

Шалгалт тохируулгын муруйг бий болгохын тулд хроматографын ууршуулагч руу 0.4 концентрацитай кломазоны ажлын стандарт уусмалаас 5 мкл хийнэ; 1.0; 2.0; 4.0 ба 10.0.

Хамгийн багадаа 5 зэрэгцээ хэмжилт хийнэ. Концентраци бүрийн дундаж хроматографийн оргил өндрийг ол. Уусмал дахь кломазоны концентрациас мм-ээр хроматографийн оргилын өндрийн хамаарлыг мкг/мл-ээр тодорхойлох шалгалт тохируулгын графикийг (А эсвэл В) байгуул.

2.6. Тодорхойлолт Тодорхойлолт

Шинжилсэн усны 100 мл дээжийг 250 мл-ийн багтаамжтай ялгах юүлүүрт хийж, 10 мл 25%-ийн натрийн гидроксидын усан уусмал нэмж, хольж, 20 мл н-гексан нэмнэ. Юүлүүрийг 3 минутын турш сэгсэрч, фазыг салгасны дараа гексан давхаргыг 100 мл лийр хэлбэртэй колбонд хийж, атираат цаасан шүүлтүүр дээр конус хэлбэрийн юүлүүрт байрлуулсан усгүй натрийн сульфатын давхаргаар дамжуулна. Усан дээжээс эмийг гаргаж авахдаа 20 мл н-гексан ашиглан хоёр удаа давтана. Хосолсон гексаны хандыг эргэдэг вакуум ууршуулагч дээр 40-С-ийн температурт бараг хуурай болтол ууршуулж, үлдэгдэл нь агаарын урсгал эсвэл өндөр цэвэр азотоор үлээлгэнэ. Хуурай үлдэгдлийг 0.1 (HPLC, TLC) эсвэл 0.25 мл (GLC) n-гександ уусгаж, хроматографийн аргуудын аль нэгээр шинжилнэ.

2.7. Хроматографийн нөхцөл

Хэт ягаан туяаны мэдрэгчтэй шингэн хроматограф Миличром (Орос).

Ган багана 64 мм урт, дотоод диаметр 2 мм,

Силасорб 600 дүүргэсэн, ширхэгийн хэмжээ 5 микрон.

Баганын температур: өрөөний температур.

Хөдөлгөөнт үе шат: гексан-изопропанол-метанол (90:5:5, v/v).

Элюентийн урсгалын хурд: 100 мкл/мин.

Ашиглалтын долгионы урт: 240 нм.

Мэдрэмж: 0.4 нэгж масштаб дээрх шингээлт.

Тарьсан дээжийн хэмжээ: 5 мкл.

Clomazone гаргах хугацаа: ойролцоогоор 6 минут.

Шугаман илрүүлэх хүрээ: 20 - 200 нг.

40 мкг/мл стандарт уусмалаас их оргил гаргаж буй дээжийг HPLC зэрэглэлийн хөдөлгөөнт фазаар шингэлнэ.

"Цвет-570" хийн хроматограф нь тогтмол ионы рекомбинацын хурдыг илрүүлэгчтэй.

Шилэн багана 1 м урт, дотоод диаметр 3 мм, 5% SE-30 (0.16 - 0.20 мм) бүхий Chromaton N-AW-DMCS дүүргэсэн.

Электрометрийн ажлын масштаб нь 64 х 10 10 Ом байна.

Дуу хураагуурын соронзон хальсны хурд нь 200 мм/цаг.

Баганын термостатын температур - 190 -С

илрүүлэгч - 300 -С

ууршуулагч - 220 -С

Тээвэрлэгч хий (азот) хурд - 60 мл / мин.

Тарьсан дээжийн хэмжээ 5 мкл байна.

Clomazone гаргах хугацаа 2.5 минут байна.

Шугаман илрүүлэх хүрээ: 2 - 50 нг.

10 мкг/мл стандарт уусмалаас их оргил гаргаж буй дээжийг гексанаар шингэлнэ.

Гамма-HCH байгаа тохиолдолд кломазоныг тодорхойлох нарийвчлалыг нэмэгдүүлэх. ойрын цагхадгалах, кломазоныг төвлөрсөн хүхрийн хүчлээр боловсруулж дээжээс зайлуулна. Дээжний давтан шинжилгээ нь анхдагч хроматографийн дохионд кломазоны хувь нэмрийг тодорхойлох боломжтой болгодог.

2.6-д заасны дагуу колбонд хийсэн гексаны уусмалыг тоо хэмжээгээр авна

(эсвэл түүний хэсгийг) "Silufol", "Kieselgel 60F-254" эсвэл "HPTLC хавтан" хроматографийн хавтан дээр хэрэглэнэ. Стандарт уусмалыг ойролцоох 1, 2, 5, 10 мкг кломазоны агууламжтай тохирох хэмжээгээр хэрэглэнэ. Хавтанг n-гексан-ацетоны холимог (4:1, эзэлхүүн) агуулсан хроматографийн камерт хийнэ. Хроматограмм үүссэний дараа хавтанг тасалгаанаас гаргаж, уусгагчийг уурших хүртэл зүтгүүрийн дор байрлуулж, дараа нь хөгжиж буй урвалжуудын аль нэгээр эмчилж, хэт ягаан туяаны дор 5 минутын турш байрлуулна. "Silufol" хавтан, "HPTLC plates" ба "Kieselgel 60F-254" дээрх эмийг нутагшуулах бүс нь Rf утга нь 0.35, 0.85, 0.43 тус тусад нь саарал хүрэн толбо хэлбэрээр харагдана. TLC-ээр кломазоныг тодорхойлохын тулд та "Алуграм" ба "Полиграм" хавтанг (Германд үйлдвэрлэсэн) ашиглаж болно. Эдгээр хавтан дээрх кломазоны Rf утга нь 0.37 ба 0.38 байна.

3. Аюулгүй ажиллагааны шаардлага

Органик уусгагч, хортой бодис, цахилгаан халаагууртай ажиллахдаа нийтээр хүлээн зөвшөөрөгдсөн аюулгүй байдлын дүрмийг дагаж мөрдөх шаардлагатай.

4. Хэмжилтийн алдааны хяналт

Хэмжилтийн алдаа ба дахин давтагдах байдлын үйл ажиллагааны хяналтыг MI 2335-95-ийн зөвлөмжийн дагуу гүйцэтгэдэг. GSI "Тоон химийн шинжилгээний үр дүнгийн дотоод чанарын хяналт."

5. Хөгжүүлэгчид

Юдина Т.В., Федорова Н.Е. (Ф.Ф. Эрисманы нэрэмжит Холбооны судалгааны төв).

Давидюк Е.И. (UkrNIIGINTOX, Киев); Кисенко М.А., Демченко В.Ф. (Украины Шинжлэх Ухааны Академи, Анагаахын Шинжлэх Ухааны Академийн Хөдөлмөрийн Анагаах Ухааны Хүрээлэн, Киев).

9885 0

HPLC нь шингэний баганын хроматограф бөгөөд сорбцийн янз бүрийн механизмуудыг ашиглаж болно. Үндсэндээ HPLC нь сонгодог шингэн баганын хроматографийн орчин үеийн хэлбэр юм. HPLC-ийн хамгийн чухал чанарын шинж чанаруудын заримыг доор жагсаав.
- үйл явцын өндөр хурд нь салгах хугацааг хэдэн цаг, өдрөөс минут хүртэл бууруулах боломжтой болгосон;
- хроматографийн бүсийн бүдгэрэлтийн хамгийн бага зэрэг нь сорбцийн тогтмол байдлын хувьд бага зэрэг ялгаатай нэгдлүүдийг салгах боломжийг олгодог;
- мэдээлэл салгах, боловсруулах өндөр механикжуулалт, автоматжуулалтын ачаар баганын шингэн хроматографи нь дахин давтагдах, нарийвчлалын шинэ түвшинд хүрсэн.

Сүүлийн хэдэн арван жилийн эрчимтэй судалгаа, хуримтлагдсан асар их хэмжээний туршилтын өгөгдөл нь өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн аргын хүрээнд хувилбаруудыг ангилах талаар ярих боломжийг бидэнд олгож байна. Мэдээжийн хэрэг, дээр дурдсан сорбцийн механизмын дагуу ангилал хүчинтэй хэвээр байна.

Хөдөлгөөнт болон суурин фазын харьцуулсан туйлшрал дээр үндэслэн нийтлэг ангиллыг хийдэг. Энэ тохиолдолд хэвийн ба урвуу фазын хроматографийн ялгааг хийдэг.

Хэвийн фазын хроматографи (NPC) нь хөдөлгөөнт фаз нь хөдөлгөөнгүй фазаас бага туйлтай байдаг HPLC-ийн хувилбар бөгөөд хадгалалтыг тодорхойлдог гол хүчин зүйл нь сорбатын гадаргуу эсвэл сорбентын эзэлхүүнтэй шууд харилцан үйлчлэлцдэг гэж үзэх үндэслэлтэй.

Урвуу фазын хроматографи (RPC) нь HPLC-ийн хувилбар бөгөөд хөдөлгөөнт фаз нь хөдөлгөөнгүй фазаас илүү туйлширч, хадгалалт нь сорбатын молекулуудын гадаргуу эсвэл сорбентын эзэлхүүнтэй шууд харьцах замаар тодорхойлогддог; Энэ тохиолдолд ионжуулсан сорбатууд нь гадаргуу дээр шингэсэн хөдөлгөөнт фазын ионоор солигддоггүй.

Ион солилцооны хроматографи нь хөдөлгөөнт фазын сорбцсон ионуудыг хроматографид хийгдэж буй бодисын ионуудтай солилцох замаар сорбци хийх хувилбар юм; Лигандын солилцооны хроматографийг ижил төстэй байдлаар тодорхойлж болно.

Динамикаар өөрчилсөн сорбент дээрх хроматографи нь сорбат нь сорбентын гадаргуутай шууд харьцдаггүй, харин ялгаруулагчийн гадаргуугийн давхаргын молекулуудтай холбогддог HPLC-ийн хувилбар юм.
Ион хос хроматографи нь ионжсон нэгдлүүдийн урвуу фазын хроматографийн хувилбар бөгөөд хөдөлгөөнт фаз руу гидрофобын эсрэг ион нэмдэг бөгөөд энэ нь системийн сорбцийн шинж чанарыг чанарын хувьд өөрчилдөг.

Хэмжээ хасах хроматографи нь хөдөлгөөнгүй фазын нүх сүв дэх янз бүрийн хэмжээтэй молекулуудын тархалтын хурдны ялгаан дээр үндэслэн нэгдлүүдийг молекулын жингээр нь ялгах арга юм.

HPLC-ийн хувьд маш чухал шинж чанар нь сорбентуудын хэмжээ, ихэвчлэн 3-5 микрон, одоо 1.8 микрон хүртэл байдаг. Энэ нь бодисын нарийн төвөгтэй хольцыг хурдан бөгөөд бүрэн салгах боломжийг олгодог (шинжилгээний дундаж хугацаа 3-30 минут).

Салгах асуудлыг хроматографийн багана ашиглан шийддэг бөгөөд энэ нь сорбентоор дүүргэсэн хоолой юм. Шинжилгээ хийхдээ тодорхой найрлагатай шингэнийг (угаагч) тогтмол хурдтайгаар хроматографийн баганаар дамжуулдаг. Нарийн хэмжсэн дээжийн тунг энэ урсгалд тарьдаг. Хроматографийн баганад оруулсан дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь баганын сорбенттой харилцан адилгүй хамааралтай байдаг тул түүнтэй хамт хөдөлдөг. өөр өөр хурдтаймөн өөр өөр цаг үед детектор руу дараалан хүрнэ.

Тиймээс хроматографийн багана нь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг салгах сонголт, үр ашгийг хариуцдаг. Янз бүрийн төрлийн баганыг сонгосноор шинжлэгдэх бодисыг ялгах зэргийг хянах боломжтой. Нэгдлүүдийг хадгалах хугацаагаар нь тодорхойлно. Бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн тоон тодорхойлолтыг хроматографийн баганын гаралттай холбосон детектор ашиглан хэмжсэн аналитик дохионы хэмжээн дээр үндэслэн тооцоолно.

Сорбент. HPLC-ийн хөгжил нь сайн кинетик шинж чанар, олон янзын термодинамик шинж чанартай сорбентуудын шинэ үеийг бий болгохтой ихээхэн холбоотой юм. HPLC дахь сорбентуудын гол материал нь цахиурлаг гель юм. Энэ нь механик бат бөх бөгөөд мэдэгдэхүйц сүвэрхэг шинж чанартай бөгөөд энэ нь баганын баганын хэмжээтэй том солилцооны багтаамжийг өгдөг. Хамгийн түгээмэл ширхэгийн хэмжээ нь 5-10 микрон юм. Бөөмбөлгүүдийн бөмбөрцөг хэлбэртэй ойртох тусам урсгалын эсэргүүцэл бага байх тусам үр ашиг нь өндөр байх болно, ялангуяа маш нарийн хэсгийг (жишээлбэл, 7 +1 микрон) шүүж авбал илүү үр дүнтэй байдаг.

Цахиурлаг гелийн өвөрмөц гадаргуу нь 10-600 м/г байна. Цахиурт гель нь гадаргуу дээр залгагдсан янз бүрийн химийн бүлгүүдээр (C-18, CN, NH2, SO3H) өөрчлөгдөж болох бөгөөд энэ нь түүн дээр суурилсан сорбент ашиглан олон төрлийн нэгдлүүдийг ялгах боломжийг олгодог. Цахиурт гелийн гол сул тал нь рН-д химийн эсэргүүцэл багатай байдаг< 2 и рН >9 (цахиур нь шүлт ба хүчилд уусдаг). Тиймээс одоогоор рН-ийн 1-ээс 14 хүртэл тогтвортой полимер дээр суурилсан сорбент, жишээлбэл, полиметилметакрилат, полистирол гэх мэтийг хайж байна.

Ион солилцооны хроматографийн сорбент. Салах онцлогоос шалтгаалан (хүчиллэг эсвэл шүлтлэг орчинд) үндсэн материал нь SO3 -H+ (хүчтэй хүчиллэг катион солилцогч) эсвэл -COO-Naf (сул хүчиллэг катион) -тай өөр өөр түвшний хөндлөн холбоос бүхий дивинилбензол бүхий полистирол руу сорбент үүсгэдэг. солилцогч), -H2N+ (CH3) бүлгүүд гадаргуудаа залгагдсан 3Cl- (хүчтэй үндсэн анион солилцуур) эсвэл -N+HR2Cl- (сул үндсэн анион солилцуур).

Гель нэвчүүлэх хроматографийн сорбент. Үндсэн төрөл нь стирол-DVB юм. Мөн их хэмжээний сүвэрхэг шил, метил метакрилат, цахиурлаг гель хэрэглэдэг. Ионыг хасах хроматографид ижил сорбентуудыг ашигладаг.
Шахуургууд. Зөөврийн фазын (MP) урсгалыг заасан параметр бүхий баганаар хангахын тулд өндөр даралтын насосыг ашигладаг. Хамгийн чухал руу техникийн үзүүлэлт LC шахуургууд нь: урсгалын хүрээ; ажлын хамгийн их даралт; урсгалын давтагдах чадвар; уусгагч нийлүүлэлтийн импульсийн хүрээ.

Уусгагчийн нийлүүлэлтийн шинж чанараас хамааран шахуургууд нь тогтмол нийлүүлэлт (урсгал) ба тогтмол даралттай байж болно. Үндсэндээ аналитик ажлын явцад урсгалын тогтмол горимыг ашигладаг бөгөөд баганыг дүүргэх үед тогтмол даралтын горимыг ашигладаг. Ашиглалтын зарчмаас хамааран насосыг тариурын шахуурга ба поршений шахуурга гэж хуваадаг.

Тариурын шахуургууд. Энэ төрлийн шахуургууд нь ашиглалтын явцад хөдөлгөөнт фазын урсгалд импульс бараг бүрэн байхгүй гэдгээрээ онцлог юм. Шахуургын сул тал: a) уусгагчийг солих үед угаахад цаг хугацаа, уусгагч их зарцуулдаг; б) шахуургыг дүүргэх үед тусгаарлалтыг түдгэлзүүлэх; в) өндөр урсгал, даралтыг хангахын зэрэгцээ том хэмжээс, жин (хүчтэй хөдөлгүүр, том талбай бүхий том поршений хүч шаардлагатай).

Поршений шахуургууд. Энэ төрлийн шахуургууд нь хөдөлгөөнт фазын тогтмол эзэлхүүнийг удаан хугацаанд хангадаг. Ажлын хамгийн их даралт 300-500 атм, урсгалын хурд 0.01-10 мл / мин. Эзлэхүүний урсгалын давтагдах чадвар 0.5% байна. Гол сул тал нь уусгагчийг дараалсан импульсийн хэлбэрээр системд нийлүүлдэг тул даралт, урсгалын импульс байдаг.

Энэ нь LC-д ашигладаг бараг бүх мэдрэгч, ялангуяа цахилгаан химийн детекторуудын дуу чимээ ихсэх, мэдрэх чадвар буурах гол шалтгаан юм. Судасны цохилттой тэмцэх арга замууд: давхар шахуурга эсвэл хоёр шахуургатай Баг-Лай шахуурга, чийгшүүлэгч төхөөрөмж, электрон төхөөрөмж ашиглах.

Эзлэхүүний тэжээлийн хэмжээг гурван параметрээр тодорхойлно: поршений диаметр (ихэвчлэн 3.13; 5.0; 7.0 мм), түүний далайц (12-18 мм) ба давтамж (энэ нь мотор ба хурдны хайрцгийн эргэлтийн хурдаас хамаарна).

Түгээгч. Диспенсерийн зорилго нь атмосферийн даралттай дээжийг хэд хэдэн атмосфер хүртэлх даралттай баганын оролт руу шилжүүлэх явдал юм. Диспенсерт хөдөлгөөнт фазаар угааж болохгүй "үхсэн" хэмжээ байхгүй, тунг хийх явцад дээжийн элэгдэл байхгүй байх нь чухал юм. Эхлээд LC түгээгч нь мембраны цоорхойтой хийн түгээгүүртэй төстэй байв. Гэсэн хэдий ч мембран нь 50-100 атм-аас илүү тэсвэрлэх чадваргүй, химийн эсэргүүцэл хангалтгүй, тэдгээрийн хэсгүүд нь баганын шүүлтүүр, хялгасан судсыг бохирдуулдаг.

Шингэн фаз нь хийн фазаас хамаагүй бага тархалттай байдаг. Тиймээс та урсгалыг зогсоох замаар тунг хийж болно - дээж нь диспансерт элэгдэх цаг байхгүй. Дээжийг диспенсерт оруулах үед тусгай хавхлага нь уусгагчийн урсгалыг хаадаг. Баганын оролтын даралт хурдан буурч, хэдхэн секундын дараа дээжийг ердийн бичил тариураар түгээгүүрийн камерт шахаж болно. Дараа нь диспенсерийг түгжиж, уусгагч урсгалыг асааж, салгах үйл явц үүснэ.

Энэ цоргоны даралт 500-800 атм хүртэл байдаг. Гэхдээ урсгал зогсоход баганын тэнцвэрт байдал алдагдах бөгөөд энэ нь "хоосон" нэмэлт оргилууд гарч ирэхэд хүргэдэг.

Гогцоо түгээгч нь хамгийн өргөн хэрэглэгддэг. Диспенсерийг дүүргэх үед 1, 2-р оролт ба тэдгээрийн хоорондох суваг нь өндөр даралттай байдаг. 3-6 оролт, тэдгээрийн хоорондох суваг ба тунгийн гогцоо нь атмосферийн даралтын дор байдаг бөгөөд энэ нь тариур эсвэл шахуурга ашиглан гогцоог дүүргэх боломжийг олгодог. Диспенсерийг эргүүлэхэд хөдөлгөөнт фазын урсгал нь дээжийг баганад шилжүүлдэг. Алдааг багасгахын тулд гогцоог дээжээс 5-10 дахин их хэмжээгээр угаана. Хэрэв дээж нь жижиг бол гогцоонд бичил тариураар тарьж болно. Гогцооны хэмжээ ихэвчлэн 5-50 мкл байдаг.

ДЭЭР. Войнов, Т.Г. Волова

Оршил

Хроматографийн шинжилгээ нь бодисын нэгэн төрлийн байдлын шалгуур юм: хэрэв шинжилж буй бодисыг хроматографийн ямар ч аргаар тусгаарлаагүй бол түүнийг нэгэн төрлийн (хольцгүй) гэж үзнэ.

Хроматографийн аргууд болон бусад физик-химийн шинжилгээний аргуудын үндсэн ялгаа нь ижил төстэй шинж чанартай бодисыг салгах боломж юм. Салгасны дараа шинжилгээнд хамрагдсан хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ямар ч химийн, физик, физик-химийн аргаар тодорхойлж (мөн чанарыг тодорхойлох), тоо хэмжээг (масс, концентраци) тодорхойлох боломжтой.

Хроматографи нь олон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй системийн чанарын болон тоон шинжилгээ, үйлдвэрлэлийн хяналт, ялангуяа олон процессыг автоматжуулахтай холбоотой, түүнчлэн бие даасан бодисыг (жишээлбэл, үнэт металл) бэлтгэх (үйлдвэрлэлийн гэх мэт) тусгаарлахад өргөн хэрэглэгддэг. ), ховор ба тархай бутархай элементүүдийг салгах.

-ын дагуу нэгтгэх байдалЭлюентийг хий (GC, GC) болон шингэн хроматографи (HPLC, HPLC) гэж ялгадаг.

Өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (HPLC) нь синтетик полимер, эм, угаалгын нунтаг, уураг, гормон болон бусад биологийн чухал нэгдлүүдийг шинжлэх, ялгах, цэвэршүүлэхэд ашиглагддаг. Өндөр мэдрэмтгий детектор ашиглах нь биологийн судалгаанд маш чухал ач холбогдолтой маш бага хэмжээний бодистой (10 -11 -10 -9 г) ажиллах боломжтой болгодог.

HPLC аргыг янз бүрийн шингэн хроматографууд дээр явуулдаг. Орчин үеийн шингэн хроматографууд нь нарийн төвөгтэй бодисын хольцыг бие даасан бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд салгаж, тусгаарлагдсан хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн чанарын болон тоон шинжилгээг хийх зориулалттай.

өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи пропифеназон

ОХУ-ын эмийн үйлдвэрлэлийн практикт GMP-ийг нэвтрүүлсэнтэй холбогдуулан. Шинжилгээний орчин үеийн нэгдсэн аргуудыг ашиглахын ач холбогдол нь үйлдвэрлэлийн аж ахуйн нэгжүүд болон эмийн чанарын улсын хяналтын тогтолцоонд улам бүр нэмэгдэж байна. Эмийн үйлдвэрлэл хөгжсөн орнуудын (АНУ, Англи, Япон, ЕХ-ны орнууд) бодис, бэлэн эмийн чанарыг шинжлэх үндсэн арга бол өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографи (HPLC) юм. Энэ арга нь шинж чанараараа эмийн 80-90% -д тоон шинжилгээ хийх шаардлагыг хангадаг.

Аливаа хроматографийн тодорхойлолтыг гүйцэтгэх техник нь зарим ерөнхий шаардлага тавьдаг. Юуны өмнө шинэхэн мэргэжилтнүүдийн дунд хамгийн их асуулт тавьдаг хүмүүсийг тэмдэглэх нь зүйтэй.

1. Өрөөний агааржуулагч. Шингэн хроматограф суурилуулсан өрөөнд температурын гэнэтийн хэлбэлзэл байх ёсгүй.

Температурыг өөрчлөх нь тусгаарлалтыг хадгалах, үр ашиг, тэр ч байтугай сонгох чадварыг өөрчилж болно.

Зуны халуунд болзолгүй өрөөнд хэвийн фазтай, бага буцалгах хөдөлгөөнт фазуудтай ажиллах нь маш хэцүү болдог. Өдрийн туршид тэдгээрийн аажмаар ууршилт явагддаг бөгөөд энэ нь шингэний найрлага өөрчлөгдөхөд хүргэдэг.

Бага температурт усаар баяжуулсан ба/эсвэл спирт агуулсан уусмалуудтай ажиллахад асуудал үүсдэг. Ийм шингээгчийн зуурамтгай чанар нь температур буурах тусам огцом нэмэгддэг бөгөөд энэ нь систем дэх даралтыг нэмэгдүүлэхэд хүргэдэг.

Температурын бага хэлбэлзэл нь салгахад үзүүлэх нөлөөг хроматографийн багана эсвэл бүх шингэний системийг (бүх хроматографийн хувьд боломжгүй) термостатаар арилгаж болно.

2. Эрчим хүчний чанар. Орчин үеийн ихэнх хроматографууд нь цахилгаан тогтворжуулах системээр тоноглогдсон байдаг ч газар дээрх эрчим хүчний хангамжийн чанар өндөр байх ёстой. Хэрэв эрчим хүчний хангамж хангалтгүй бол автомат горимд хэд хэдэн тодорхойлолтыг эхлүүлэх нь эвдрэлээс болж бүтэлгүйтэж магадгүй юм.

3. Уусгагчийн цэвэр байдал. Хөдөлгөөнт фазыг бэлтгэхийн тулд ялангуяа цэвэр уусгагчийг ашиглах хэрэгтэй.

Ерөнхийдөө хөдөлгөөнт фазын цэвэр байдалд тавигдах шаардлага нь илрүүлэх арга, ялгаруулах арга (изократ эсвэл градиент), детекторын зорилтот аналитийн мэдрэмж, түүний концентрацаас хамаарна.

Хэт ягаан туяаны илрүүлэлтийг ашиглах үед 230-240 нм-ээс бага богино долгионы мужид шилжих үед уусгагчийн цэвэр байдалд тавигдах шаардлага нэмэгддэг. 220-240 нм-ээс их долгионы урттай хэт ягаан туяаг илрүүлэх үед изократ ялгаруулалтын хувьд "өндөр цэвэршилттэй" уусгагчийг ашиглаж болно. болон нэрмэл ус. Хөдөлгөөнт үе шатанд нэмсэн бүх урвалжууд нь хангалттай цэвэршилттэй байх ёстой; Хэрэглэхийн өмнө талст урвалжуудыг дахин талсжуулах нь ашигтай байж болох юм.

Градиент уусмалын хувьд "шингэн хроматографийн" зэрэглэлийн уусгагч болон давхар нэрмэл усыг ашиглах шаардлагатай. Градиент элюцийн аргад (урвуу фазын хроматографид) тусгай шаардлагыг усан буфер, ялангуяа усны цэвэр байдалд тавьдаг. Юуны өмнө, энэ нь шингээлтийн эхний үе шатанд усан буферээр баяжуулсан хөдөлгөөнт фазаас бохирдуулагч бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг шингээж, дараа нь шүүрч, хроматограмм дээр "овойлт" хэлбэрээр гарч ирдэгтэй холбоотой юм. босго” болон бие даасан оргилууд нь ашигтай аналитын дохиог сонгоход ихээхэн хүндрэл учруулдаг.

Градиент уусмалын горим дахь бодисын ул мөрийн хэмжээг бүлэг тодорхойлоход хамгийн цэвэр уусгагч шаардлагатай.

Градиент элюцийн горимд тодорхойлох, түүнчлэн изократик горимд нарийвчлалыг тодорхойлохын тулд хөдөлгөөнт фазыг нэг удаа ашиглах ёстой, өөрөөр хэлбэл элюатыг хаях эсвэл хаях шаардлагатай.

Изократик шүүрлийн үед мэдрэмтгий байдлын тодорхой асуудал байхгүй бол зарцуулсан уусмалыг дахин ашиглаж болно. Илрүүлэгчийг детектороор дамжуулсны дараа хөдөлгөөнт фазыг агуулсан саванд буцааж өгдөг системийг "дахин боловсруулах систем" гэж нэрлэдэг. Ийм систем нь стандарт багана (250x4.6, 150x4.6) дээр ойролцоогоор 1 мл / мин-ийн эзэлхүүний урсгалын хурдаар олон тооны ердийн изократ тодорхойлоход ялангуяа ашигтай байдаг. Эдгээр тохиолдолд дахин боловсруулах систем нь өдөрт 200-300 мл органик уусгагчийг хэмнэх боломжийг олгодог. Энэхүү эдийн засгийн систем нь маш цэвэр, үнэтэй уусгагчийг шинжилгээнд ашиглах боломжийг олгодог. Бичил багана (80х2, 100х2) ашиглах тохиолдолд үнэтэй уусгагчийг хэмнэх асуудал бага хурцаар тавигддаг тул салгахад хөдөлгөөнт фазын хэмжээ бага байх шаардлагатай.

4. Уусгагчийг хийгүйжүүлэх. Хроматографид хөдөлгөөнт фаз бэлтгэхэд ашигладаг уусгагч нь ихэвчлэн ууссан агаар агуулдаг. Ус нь ялангуяа их хэмжээний агаар агуулдаг.

Хийггүйжүүлсэн бодисуудтай ажиллахдаа агаарын бөмбөлөгүүд нь шингэний системийн янз бүрийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд ордог: шахуурга, багана, хялгасан судас, детектор. Шингэн системд агаар орох үед шингэний систем дэх даралтын хэлбэлзлээс болж хроматограмм дээр өндөр, үе үе дуу чимээ гарч ирдэг. Энэ нь шинжилгээний мэдрэмжийн огцом бууралтад хүргэдэг.

Угаагч бодисоос агаарыг зайлуулахын тулд түүнийг хийг арилгана. Дүрмээр бол зөвхөн урвуу фазын тусгаарлалтанд зориулсан шингээгчийг хийн арилгадаг - учир нь усан-органик хольц нь их хэмжээний ууссан агаар агуулдаг. Хийг саармагжуулах ажлыг ялангуяа градиент уусмалын үед, түүнчлэн флюориметрийн илрүүлэлтийг ашиглах үед болгоомжтой хийх шаардлагатай.

Урвуу фазын горимд градиент шүүрүүлэх явцад хоёр ялгаруулагч холилдоно - өөр өөр найрлагатай усан-органик хольц. Хийг саармагжуулах бодисыг холих нь ууссан агаарыг эрчимтэй ялгаруулахад хүргэдэг бөгөөд энэ нь бүхэлдээ тодорхойлоход чухал ач холбогдолтой (хроматограммд агаарын бөмбөлгийг тэг шугам дээр хурц "ялгаралт" гэж тэмдэглэсэн байдаг).

Хөдөлгөөнт үе шатанд ууссан агаарын өндөр агууламжтай үед флюориметрийн илрүүлэлтийн мэдрэмж буурдаг (флюресценцийн уналт үүсдэг). Тиймээс флюориметрийн илрүүлэлтийг ашиглахдаа ялгаруулагчийг хийгүйжүүлэхэд онцгой анхаарал хандуулах хэрэгтэй.

Шингэн хроматографийн хөдөлгөөнт фазын хийгүйжүүлэх гурван үндсэн арга байдаг.

А. Вакуумаар хийгүйжүүлэх - угаагч бодисыг усны тийрэлтэт насосны вакуум дор Claisen колбонд хэдэн минут байлгана. Хийгүйжүүлэх ажлыг хийхдээ шингээгчийг буцалгахаас зайлсхийх хэрэгтэй.

б. Дулааны хийгүйжүүлэлт нь ус ихтэй ус-органик шингээгчийг хийн тайлахад ашигладаг. Хөдөлгөөнт фазыг таглаагаар битүүмжлээгүй колбонд хийж, ойролцоогоор 50 градусын температурт усан ваннд үлдээнэ. 10-15 минутын дараа колбыг таглаагаар битүүмжилж, тасалгааны температурт урсгал усаар хөргөнө.

В. Хэт авианы хий тайлах. Хөдөлгөөнт үе шатыг хэдэн минутын турш хэт авиан шинжилгээгээр эмчилж, дараа нь 10-15 минутын турш тогтворжуулна. Энэ арга нь ихэвчлэн усан-органик шингээгчийг хийн тайлахад хангалттай үр дүнтэй байдаггүй.

Шингэн хроматографийн орчин үеийн шахуургын системүүд нь автомат хий тайлах системээр тоноглогдсон. Гэсэн хэдий ч градиент шинжилгээ хийхдээ өгөгдсөн аргуудын аль нэгийг ашиглан хөдөлгөөнт фазын аль алиныг нь эхлээд "гараар" арилгах нь дээр.

5. Хөдөлгөөнт фазын шүүлтүүр. Шахуургын тасралтгүй ажиллагааг хангахын тулд мембран шүүлтүүр ашиглан хөдөлгөөнт фазыг вакуум дор шүүхийг зөвлөж байна.

6. Шингэн системийн багана ба эд ангиудыг угаах. Давс ба хүчил агуулсан усан-органик хөдөлгөөнт фазуудтай ажилласны дараа шингэний системийг бүхэлд нь (баганыг оруулаад) 5-10% органик уусгагч нэмсэн нэрмэл усаар угаана. Энэхүү угаалга нь ажлын бус цагаар хроматографийн шингэний системийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд болон суурин фазын өөрөө нэмэлт элэгдэлд орохгүйн тулд хийгддэг.

Ийм угаалга хийхгүй байх нь юуны түрүүнд насосыг зогсоосны дараа уусмалаас давс нь түүний хэсгүүд болон детекторын кюветийн хананд хуримтлагддаг. Энэ нь эргээд төхөөрөмжийг бүхэлд нь тогтворгүй ажиллуулах, түүнчлэн насосны хөдөлгөөнт хэсгүүдийн дутуу элэгдэлд хүргэдэг. Системийг давс, хүчил агуулсан уусмалаас тогтмол зайлж чадахгүй байх нь суурин фазын ашиглалтын хугацааг багасгахад хүргэдэг.

Шингэний системийг биологийн бохирдлоос сэргийлэхийн тулд угаалгын усанд зарим органик уусгагч нэмэх шаардлагатай.

7. Өмнөхтэй холилдохгүй хөдөлгөөнт шинэ үе шатанд шилжих. Энэ шилжилт нь хөдөлгөөнт фазуудын аль алинд нь тодорхойгүй холилдох завсрын уусгагчаар - ихэвчлэн изопропанол эсвэл ацетоноор дамждаг.

Усан уусгагчаас туйлтгүй уусмал руу шилжихийн тулд шингэн системийг органик уусгагч нэмсэн усаар угааж, дараа нь хроматографийн баганыг зайлуулж, системийг изопропанол (ацетон) -аар угааж, системийг бус уусмалаар угаана. -туйлт ялгаруулагч, мөн шинэ багана суурилуулах.

Урвуу шилжилтийн хувьд хроматографийн баганыг зайлуулж, шингэний системийг изопропанол (ацетон), дараа нь усан уусмалаар угааж, дараа нь шинэ баганыг суурилуулна.

Усан уусмалаас туйлтгүй бодис руу шилжихдээ насосны битүүмжлэлийн материал нь туйлтгүй уусгагчтай ажиллахад зориулагдсан эсэхийг урьдчилан шалгаарай.

8. Дээжийг шүүх. Шинжилсэн дээжинд уусаагүй түдгэлзүүлсэн бодис байгаа бол дээжийг тариурт холбосон мембран шүүлтүүрээр шүүж авахыг зөвлөж байна. Харамсалтай нь, хэрэв дээж нь нэг миллилитрээс бага бол ийм аргаар шүүнэ гэдэг бараг боломжгүй юм.

Түдгэлзүүлсэн бодис агуулсан дээжийг тогтмол шинжлэх үед багана (фрит) дээрх оролтын шүүлтүүр бөглөрч болзошгүй бөгөөд энэ нь үндсэндээ систем дэх даралтыг нэмэгдүүлэхэд хүргэдэг. Энэ тохиолдолд оролтын шүүлтүүрийг солих нь дээр бөгөөд хэрэв орлуулахгүй бол 10-15 минутын турш хэт авианы эмчилгээтэй органик уусгагчаар зайлж угаана.

Асуудлыг шийдэх хамгийн оновчтой шийдэл бол баганын өмнө шугамын шүүлтүүрийг ашиглах явдал юм. Шугамын шүүлтүүр нь сольж болох фрит агуулдаг - багана дээрхтэй адил. Шугаман шүүлтүүр дээр фритийг солих нь нэлээд олон удаа хийж болох ердийн ажил юм.

9. Урьдчилсан баганын хэрэглээ. "Бохир" дээжийг тогтмол шинжилснээр хроматографийн багана хурдан бохирдож, ялгах чадвараа алддаг. Энэ тохиолдолд дээжийг сайтар бэлтгэхийн сайн мэддэг хувилбар бол үндсэн баганыг бохирдлоос хамгаалдаг урьдчилсан баганыг ашиглах явдал юм.

Заримдаа дээж бэлтгэх ажлыг огт хийхгүй байхыг зөвлөж байна, гэхдээ үндсэн баганын урд шугамын шүүлтүүр, урьдчилсан баганыг байрлуулах нь зүйтэй. Энэхүү схемийн давуу тал нь бага хөдөлмөр, урвалж бүхий шинжилгээ хийх энгийн бөгөөд хурдан юм.

10. Хроматографийн баганыг хадгалах. Урт хугацааны хадгалалтын өмнө хроматографийн баганыг угааж, суурин фазын төрөл тус бүрт тодорхой уусгагчаар дүүргэдэг.

Тиймээс хэвийн фазын системд ажиллах хроматографийн багана нь ихэвчлэн өндөр буцалж буй нүүрсустөрөгчөөр, жишээлбэл изооктанаар дүүрдэг. Урвуу фазыг усаар угааж, ацетонитрилээр дүүргэж, эсвэл изопропанолоор бага тэжээлийн хурдаар дүүргэнэ. Усан буфертэй ажиллахад зориулагдсан үе шатуудыг бага хэмжээний натрийн азид (бактериостатик) нэмсэн усаар дүүргэдэг.

Баганыг хадгалах зааврыг түүний паспорт дээр зааж өгч болно.

11. Усны буферийг хадгалах. Тогтмол тодорхойлох тохиолдолд хөдөлгөөнт фазыг бэлтгэхийн тулд их хэмжээний усан буферийг нэн даруй бэлтгэх нь маш тохиромжтой. Харамсалтай нь усан буферт бактериостатик бодис болох натрийн азид нэмэхгүй бол хэдхэн хоногоос илүү хугацаагаар хадгалах боломжгүй. Фосфатын буфер дээр суурилсан хөдөлгөөнт фазууд маш муу хадгалагддаг.

Заримдаа "шинжилгээний давтагдах чадварыг нэмэгдүүлэх" зорилгоор их хэмжээний усан буфер бэлтгэдэг. Ерөнхийдөө энэ аргын хувьд шинжилгээний давтагдах чадвар нэмэгдэхгүй ч буфер хадгалахтай холбоотой асуудал зайлшгүй гарч ирдэг.

Ерөнхийдөө долоо хоног эсвэл нэг өдрийн турш усан буфер бэлтгэх үү гэсэн асуултын хариулт юм. - зөвхөн тав тухтай байдлын зарчмаар тодорхойлогддог.

12. Шалгалт тохируулгын тогтмол байдал. Дүрмээр бол стандартын дагуу калибровкийг өдөр бүр эсвэл шинэ уусмал бэлтгэх болгонд хийдэг.

Хроматографийн систем тогтвортой байдалд хүрэх үед шалгалт тохируулга хийдэг; Унших боломжтой параметрүүд нь стандарт оргилыг хадгалах хугацаа, түүний талбай (спектрофотометрийн илрүүлэх тохиолдолд - лавлагааны долгионы уртад), спектрийн харьцаа (сканнердах эсвэл диод-массив спектрофотометрийн детектор ашиглах тохиолдолд).

Ажлын эхэнд стандартад хоёр удаа дүн шинжилгээ хийж, хадгалах хугацааг давтах чадварыг баталгаажуулж болно.

1. "BICILLIN-3" эмийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг HPLC-ээр тодорхойлох

Бициллин-3 нь удаан хугацааны үйлчилгээтэй пенициллин бөгөөд бензилпенициллиний (АД) натри, новокаин, бензатины давсны холимог юм. Одоогийн VFS 42-3034-98 стандартын дагуу эм дэх АД-ыг тодорхойлохдоо HPLC, новокаиныг спектрофотометрээр тодорхойлж, бензатин (N,N1-дибензилэтилендиамин) -ийг натрийн хлоридоор ханасан усан уусмалаас эфирээр гаргаж авдаг. . Эфирийг ууршуулсаны дараа бензатиныг перхлорт хүчлээр титрлэх замаар тодорхойлно.

Европын фармакопейд АД-ын бензатины давс дахь АД ба бензатины агууламжийг 3.5 рН-д метанол, натрийн фосфатын уусмалын холимогт градиент HPLC ашиглан тодорхойлдог.

Ажлын зорилго нь бициллин-3 дахь бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тодорхойлох HPLC аргыг изократик горимд боловсруулах явдал юм.

туршилтын хэсэг

Бид AKO Sintez (Курган) үйлдвэрлэсэн бициллин-3-ыг ашигласан. Судалгааг Уотерс (АНУ) компанийн 510 мкл насосны загвартай хроматограф, хэт ягаан туяаны мэдрэгч 481 загвар, 50 мкл багтаамжтай тунгийн гогцоотой 7125 (Реодин) инжекторын загварт хийсэн. Илрүүлэхийн тулд 214 нм долгионы уртыг ашигласан бөгөөд үүнд дүн шинжилгээ хийсэн бүх нэгдлүүд сайн илэрсэн байна. Хроматограммыг бүртгэх, оргил талбай, хадгалах үндсэн параметрүүдийг тооцоолохдоо аналог-тоон хувиргагчтай персонал компьютер болон Multichrome программ ашиглан гүйцэтгэсэн.

HPLC аргын урвуу фазын хувилбарыг Phenomenex (АНУ)-ын 250 х 4.6 мм хэмжээтэй Luna C18 (2) багана дээр судалсан бөгөөд учир нь багана нь харьцангуй хямд бөгөөд оргил гаралтын тэгш хэмийг сайжруулж байсан. органик аминууд. Үүнтэй ижил зорилгоор нэг бүрэлдэхүүн хэсэг болох триэтиламин агуулсан, рН 5.0 агуулсан буферийн уусмал бүхий ацетонитрилийн холимогийг хөдөлгөөнт фаз болгон ашигласан.

Хөдөлгөөнт фазыг бэлтгэх анхны шийдэл нь фосфорын хүчлийн 2.5 м уусмал бөгөөд триэтиламинаар рН 5.0 хүртэл титрлэнэ. Анхны уусмалыг усаар 10 дахин шингэлж HPLC-ийн буфер уусмалыг бэлтгэсэн бөгөөд үүссэн буферийн уусмалаас 750 мл-ийг 250 мл ацетонитрилтэй хольсон. Үүний зэрэгцээ хөдөлгөөнт фазын илэрхий рН утга 5.7 болж нэмэгдсэн. Хөдөлгөөнт фазын хурд нь 1 мл / мин байна. Хроматографийг өрөөний температурт явуулсан. Шинжилгээ хийх хугацаа 20 мин.

Эмийн найрлагад орсон бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь хүчил-суурь шинж чанараараа ялгаатай байдаг тул АД нь хүчил, новокаин ба бензатин нь суурь бөгөөд рН нэмэгдэхийн хэрээр иончлолын өөрчлөлт нь өөр өөр чиглэлд шилждэг рН-ийн хязгаарт хадгалагдах хугацаа нэмэгддэг. Тиймээс рН-ийг өөрчилснөөр шинжлэгдсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хадгалахад тохиромжтой газрыг сонгоход хялбар байдаг. Гэсэн хэдий ч рН-ийн өсөлт нь бензатины оргилын хэлбэр мэдэгдэхүйц доройтож, буурах нь новокаин ба АД-ын гидролизийн бүтээгдэхүүнийг хангалтгүй шийдвэрлэхэд хүргэдэг. Дээрх нөхцлийн дагуу бициллин-3 бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн салангид байдлыг зурагт үзүүлэв. Новокаин, бензатин, АД-ыг хадгалах хугацаа нь тус бүр 4.2, 11.6, 14.8 минут байв.

Хамгийн чухал нь АД-ын гидролизийн бүтээгдэхүүн болох 2 оргилын хоорондох новокаины оргилын гаралт юм. Үүнтэй холбогдуулан бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг илүү сайн салгахын тулд хөдөлгөөнт фазад бага хэмжээний 2.5 М фосфорын хүчил эсвэл триэтиламины уусмал нэмж, уусмалыг хадгалсан новокаин ба АД-ын холимогийг хроматографийн аргаар тусгаарлахыг зөвлөж байна. өрөөний температурт нэг өдөр орчим.

Тоо хэмжээг тодорхойлохын тулд 20-25 мг бициллин-3-ийг 100 мл хэмжээст колбонд хийж, ацетонитрилийн 20% усан уусмалд уусгана. Метанол эсвэл түүний уусмалыг уусгахад ашиглах нь АД-ыг хэсэгчлэн метилжүүлэхэд хүргэсэн. Ацетонитрилийн концентраци ихсэх нь новокаины оргилыг өргөжүүлэхэд хүргэсэн. Концентрацийн дээд хязгаар эмийн бодисуусах чадвараараа хязгаарлагддаг. АД ба бензатины тохируулгын муруйг зохих хувиргасны дараа АД ба бензатин диацетат натрийн давсыг ашиглан олж авсан. АД-ын шалгалт тохируулгын график нь 0.1-0.5 мг / мл, бензатин ба новокаин - 0.01-0.05 мг / мл бүсэд шугаман байна. Эмийн 5 цувралын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тодорхойлох үр дүнг 1-р хүснэгтэд үзүүлэв, утга тус бүр нь 5 тодорхойлолтын дундаж юм. Харьцангуй стандарт хазайлт нь новокаин 1.6%, бензатин 3.4%, АД-ын хувьд 1.4% байна.

Хүснэгт 1-ээс харахад HPLC ашиглан тоон тодорхойлох үр дүн нь ND-ээр зохицуулагдсан зөвшөөрөгдөх хязгаарт багтаж байна.

Санал болгож буй аргын үнэн зөвийг батлахын тулд бициллин-3-ийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг АД-ын натрийн давс, бензатин диацетат, новокаиныг хольж бэлтгэсэн загвар хольцуудад шинжилэв. Үр дүнг 2-р хүснэгтэд үзүүлэв. Үр дүнг анхны бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд дахин тооцоолсон.

Хүснэгт 2-ын "Олдсон" баганын утга бүр нь 3 тодорхойлолтын дундаж үр дүн юм. Дундаж харьцангуй хазайлт нь бензатины хувьд 2.2%, новокаины хувьд 0.9%, АД-ын хувьд 0.8% байсан нь бодит дээж дэх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг шинжлэхэд илэрсэн харьцангуй дундаж стандарт хазайлттай хамааралтай байна. Бензатины хувьд үр дүнгийн тархалт нь бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс арай өндөр байдаг бөгөөд энэ нь оргилын бага өндөр, жигд бус хэлбэр, үүний дагуу интеграцийн илүү том алдаатай холбоотой юм. Бензатиныг тодорхойлоход харьцангуй том алдаа гарах өөр нэг шалтгаан нь өндөр шингэсэн бодисыг шинжлэх үед инжекторын санах ойн нөлөө байж болно. Гэсэн хэдий ч HPLC аргыг ашиглан шинжилгээ хийхэд хүлээн зөвшөөрөгдсөн хэмжээнээс арай том ийм тархалт нь бензатиныг тодорхойлоход бүрэн боломжтой юм.

дүгнэлт

1. "Бициллин-3" бэлдмэлийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг илрүүлэх, тоон тодорхойлох аргыг боловсруулсан.

2. Уг аргыг эмийн хэд хэдэн багц дээр туршсан бөгөөд мэдэгдэж буй найрлагатай загварын хольцын шинжилгээгээр баталгаажуулсан.

2. Пропифеназон агуулсан эмийн шинжилгээнд HPLC

Пропифеназон (4-изопропил-2,3-диметил-1-фенил-3-пиразолин-5-н; изопропилантипирин) нь пиразолоны цувралын мансууруулах бус өвдөлт намдаах эм бөгөөд эмийн жоргүй эмийн нэг хэсэг юм. Одоогийн байдлаар Каффетин шахмал (найрлага: пропифеназон - 0.21 гр, парацетамол - 0.25 гр, кофеин - 0.05 гр, кодеин фосфат - 0.01 гр) ба саридон (парацетамол - 0.25 гр) эмнэлгийн практикт өргөн хэрэглэгддэг. g - propy01. кофеин - 0.05 гр). Одоо байгаа зохицуулалтын баримт бичгийн дагуу кофетин шахмалуудын жинхэнэ эсэхийг шалгахын тулд сорбентын нимгэн давхаргад хроматографи хийдэг. Тоон тодорхойлолтыг эмийн салангид хэсгүүдэд бүрэлдэхүүн хэсэг тус бүрт өөр өөр аргуудыг ашиглан хийхийг санал болгож байна: спектрофотометр, титриметр, нимгэн давхаргын хроматографи ба спектрофотометрийн хослол. Саридон, парацетамол, кофеин, пропифеназоны зохицуулалтын баримт бичигт Merck Lichrospher C18 сорбент, 30: 70 харьцаатай метанол-0.01 М фосфорын хүчил бүхий хөдөлгөөнт фаз бүхий 12.5 см урт багана дээр HPLC-ээр тодорхойлогддог.

Энэхүү ажлын зорилго нь HPLC ашиглан кофетин ба саридон шахмалуудын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг илрүүлэх, тоон тодорхойлох аргыг боловсруулах явдал юм.

Уг ажилд Алкалоид Скопье (Бүгд Найрамдах Македон) үйлдвэрлэсэн кофетин шахмал, Roche Nicholas S.A., Gaillard (Франц) лабораториудад үйлдвэрлэсэн саридон, тэдгээрийн найрлагад орсон бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн бодисуудыг ашигласан. Судалгааг хэт ягаан туяаны спектрофотометрийн детектор бүхий дотоодын бичил баганын шингэн хроматограф "Милихром-4" төхөөрөмж, хөдөлгөөнгүй фазын урвуу фазын Separon-C18 сорбент бүхий 8 см урт багана дээр хийсэн. Шинжилгээнд хамрагдсан нэгдлүүдийн туйлын шинж чанар, ус ба ацетонитрилд сайн уусах чадвар нь янз бүрийн харьцаатай ус-ацетонитрилийн хольцыг хөдөлгөөнт фаз болгон сонгох боломжийг тодорхойлсон. Хөдөлгөөнт фазуудыг туршсан: ацетонитрил - 9: 1 харьцаатай ус; 7:3; 6:4; 8:2 ба ацетонитрил-ус-диэтиламин (3:2:0.2). Хөдөлгөөнт фазын найрлагыг цаашид хянахад хүндрэл учруулдаг хэвийн фазын харилцан үйлчлэлийг оруулахгүйн тулд органик уусгагчийн эзлэхүүний хувь хэмжээ 80% -иас давсан хөдөлгөөнт фазыг ашиглахаас зайлсхийсэн. Уусгагчийн эзэлхүүний 5% -иас бага байх нь хөдөлгөөнт фазын үйл ажиллагааны тогтворгүй байдал, дахин давтагдашгүй хадгалах хугацааг бий болгодог. Диэтиламиныг хөдөлгөөнт үе шатанд хувиргагч болгон нэвтрүүлснээр кофетин шахмалын бүх 4 бүрэлдэхүүн хэсгийг салгах боломжтой болсон. Октадецилийн цахиурлаг гель гадаргуу дээр ион солилцооны харилцан үйлчлэлцэх чадвартай силанолын үлдэгдэл их хэмжээний бүлгүүд байдаг нь мэдэгдэж байна. Диэтиламин нь хроматографийн процессоос силанолын бүлгийг арилгаж, оргил хэлбэрийг сайжруулж, шинжилгээний хугацааг багасгаж, цахиурын гель гадаргуу дээрх рН-ийг тохируулдаг. Хэмжилтийг дараах нөхцлөөр гүйцэтгэв: бичлэгийн масштаб 2.0, хадгалах хугацаа 0.8 сек, шингэний урсгалын хурд 50 мкл/мин, тарилгын хэмжээ 3 мкл. Оргил илрүүлэлтийг 2 долгионы уртад хийсэн - 238 ба 276 нм.

Тодорхойлолтыг судалж буй бодисын стандарт уусмалыг ашиглан урьд өмнө тодорхойлсон хадгалалтын параметрийн дагуу хийсэн.

Кофетин шахмалуудын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хөдөлгөөнт фазын ацетонитрил-ус-диэтиламин (3: 2.2: 0.2) ашиглан тусгаарладаг. Парацетамолыг хадгалах хугацаа 3.08 минут, пропифеназон - 5.73 минут, кофеин - 4.0 минут, кодеин - 4.67 минут байна.

Саридоны бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ацетонитрил-усны хөдөлгөөнт фаз (8:2) ашиглан салгаж болно. Парацетамолыг хадгалах хугацаа - 3.9 минут, пропифеназон - 5.11 минут, кофеин - 4.44 минут.

Тоон үзүүлэлтийг тодорхойлохын тулд үнэмлэхүй шалгалт тохируулгын аргыг ашигласан. Бодисын концентраци ба оргил өндрийн хооронд шууд пропорциональ хамаарал нь парацетамолын хувьд 50-200 мкг/мл, пропифеназон - 25-128 мкг/мл, кофеин - 20-50 мкг/мл, кодеин - 59-234 мкг/мл.

HPLC арга нь нарийн төвөгтэй хольцыг шинжлэхэд зарим хязгаарлалттай байдаг. Холимог дахь макро болон микро хэмжигдэхүүн дэх бодисууд нэгэн зэрэг байх үед багана хэт ачаалалтай байдаг бөгөөд энэ нь тусгаарлах чанар, шинээр гарч ирж буй оргилуудын хэлбэрт нөлөөлдөг. Кофетин дахь кодеин фосфатын агууламж парацетамол ба пропифеназонтой харьцуулахад 21-25 дахин бага байдаг тул шахмалуудын үлдсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс кодеиныг ялгахын тулд шингэн хандлахыг зөвлөж байна. Парацетамол, пропифеназон, кофеиныг рН 2.0-ийн усан уусмалаас 87.43, 87.29, 87.84% -ийн хэмжээгээр этил ацетаттай нэг удаагийн хандлах явцад гаргаж авдаг бөгөөд кодеин нь усан уусмал болон түүнийг олборлоход бүрэн үлддэг болохыг бид өмнө нь тогтоосон. концентрацийн хувьд хлороформыг рН 9.0-10.0-д хэрэглэх шаардлагатай.

Саридон, кофетин шахмал дахь парацетамол, пропифеназон, кофейны хэмжээг тодорхойлох арга.20 шахмалыг зуурмагт нунтаглаж, 0.01 г (яг жинлэсэн) шахмал нунтаг жигнэж, 25 мл-т хийнэ. хэмжээст колбонд 10 мл ацетонитрил нэмээд сайтар холино.

Колбоны агуулгыг ацетонитрилээр тэмдэглээд авчирч, хольж, шүүнэ. Уусмалыг хроматографийн баганад 3.0 мкл эзэлхүүнтэй тарина. Парацетамол, пропифеназон, кофеины агууламжийг үнэмлэхүй шалгалт тохируулгын аргаар тодорхойлно. Тодорхойлолтын үр дүнг 1, 2-р хүснэгтэд өгсөн бөгөөд үүнээс олж авсан өгөгдөл нь зохицуулалтын баримт бичгийн (ND) дагуу зөвшөөрөгдөх агуулгын хязгаарт багтаж байгаа нь тодорхой байна.

Кофетин шахмал дахь кодеин фосфатын тоон тодорхойлох арга.Ойролцоогоор 0.2 г буталсан шахмалыг (яг жинлэсэн) 20 мл усанд уусгаж, нэгэн төрлийн уусмал авах хүртэл сайтар хольж, нарийн, маш нарийн тунадасны шүүлтүүрээр шүүж, шүүлтүүрийг 10 мл цэвэршүүлсэн усаар угаана. Уусмалыг 10% хүхрийн хүчлийн уусмалаар рН 2.0 хүртэл хүчиллэгжүүлнэ. Этил ацетатаар 10 мл-ээр гурван удаа хандлана. Хандлагыг нь хаядаг. 25% аммиакийн уусмалыг рН 9.0-10.0 хүртэл усан уусмалд нэмнэ. Хлороформоор 10 мл-ээр гурван удаа хандлана. Холимог хлороформын хандыг шаазан аяганд хийж, өрөөний температурт ууршуулна. Хуурай үлдэгдлийг ацетонитрилд уусгаж, 25 мл хэмжээст колбонд хийж, ижил уусгагчаар тэмдэглэгээ хүртэл шингэлж, үүссэн уусмалаас 3 мкл хроматографийн баганад хийж, тайлбарласан нөхцөлд кодеиныг тодорхойлно. Тодорхойлолтын үр дүнг 3-р хүснэгтэд үзүүлэв.

Санал болгож буй аргын үнэн зөвийг үнэлэх, үр дүнгийн давтагдах чадварыг шалгахын тулд загвар хольц бэлтгэж, судалсан. Саридон шахмалуудын жишээн дээр үндэслэсэн өгөгдлийг 4-р хүснэгтэд үзүүлэв. Хүснэгт 4-ээс харахад тодорхойлох харьцангуй алдаа нь парацетамолын хувьд ±1.19%, пропифеназоны хувьд ±1.16%, кофейны хувьд ±1.63% -иас хэтрэхгүй байна.

Загварын холимог дахь саридон шахмалуудын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн тоон тодорхойлох арга.Парацетамол (ойролцоогоор 0.08 гр), пропифеназон (ойролцоогоор 0.05 гр), кофеин (ойролцоогоор 0.016 гр) зэргийг жинлэн авч, 50 мл хэмжээст колбонд хийж, бага хэмжээний ацетонитрилд уусгаж, ижил хэмжээгээр тэмдэглэнэ. уусгагч. 2.5 мл-ийн аликвотыг авч 25 мл хэмжээст колбонд хийж, ижил уусгагчаар эзэлхүүнийг тэмдэглэгээнд тохируулан холино, шүүнэ. Уусмалыг хроматографийн баганад 3 мкл эзэлхүүнтэй тарина.

дүгнэлт

1. HPLC ашиглан кофетин ба саридон шахмалуудын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг илрүүлэх аргыг боловсруулсан.

Парацетамолыг хадгалах хугацаа 3.08 минут, пропифеназон - 5.73 минут, кофеин - 4 минут, кодеин - 4.67 минут байна.

2. Кофетин ба саридон шахмалуудын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн тоон үзүүлэлтийг тодорхойлох HPLC аргыг санал болгосон.

Тодорхойлох харьцангуй алдаа нь парацетамол ±1.19-1.21%, пропифеназон ±1.16-1.71%, кофеин ±1.22-1.63%, кодеин ±2.95% байна.

3. "Аданол" эмийн стандартчилал

Эмийн Полисан компани нь тархины бодисын солилцооны үйл явцыг идэвхжүүлдэг бодисын солилцооны нөлөө бүхий хэд хэдэн нарийн төвөгтэй эмүүдийг боловсруулсан бөгөөд үүнд Цитофлавин (тарилга, шахмал), Аданол орно. "Аданол" нь гипокси болон ишемийн эсрэг шинж чанартай бөгөөд ирээдүйтэй юм эмцус харвалтын үр дагавартай өвчтөнүүдийг эмчлэхэд зориулагдсан. Энэ нь гэдэсний бүрхүүлээр бүрсэн шахмал тунгийн хэлбэр юм.

Энэ нь сукцины хүчил (SA), пирацетам (Pc), рибоксин (Rb), никотинамид (NA), пиридоксин гидрохлорид (PG), рибофлавин мононуклеотид (RF) агуулдаг.

Ажлын зорилго нь "Аданол" эмийн жишээг ашиглан олон бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн нарийн төвөгтэй хольц дахь UC-ийн чанарын болон тоон тодорхойлох аргыг боловсруулах явдал юм.

Уг ажилд хэт ягаан туяаны мэдрэгч бүхий Shimadzu (Япон) компанийн өндөр даралтын шингэн хроматограф болон Supelco Inc-ийн Hypersil BDS C18 багана ашигласан. ширхэгийн хэмжээ 5 микрон, урт 250 мм, дотоод диаметр нь 4.6 мм. Хөдөлгөөнт фаз нь фосфатын буфер (рН 2.6-7.0) дээр суурилсан усан-органик фаз юм. Илрүүлэх долгионы урт 206 нм. Шинжилгээний горим изократик, ялгаруулах хурд 500 мкл/мин; дээжийн хэмжээ 20 мкл. Хэт ягаан туяаны спектрийг Shimadzu-аас хэт ягаан туяаны мини-1240 спектрофотометр дээр тэмдэглэв.

Эмийн найрлагад орсон ихэнх бодисыг тоон тодорхойлохын тулд спектрофотометрийн шинжилгээний аргыг санал болгосон. Гэсэн хэдий ч эмийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн спектрийн шинж чанарыг харьцуулж үзэхэд хэт ягаан туяаны бүсэд байрлах YAK, PG, NA, Pb, Pc-ийн шингээлтийн бүсүүд хоорондоо давхцаж байгааг харуулсан (Зураг 1).

Үүнтэй холбогдуулан тэдгээрийн хольц дахь агуулгыг шууд спектрофотометрээр тодорхойлох боломжгүй бөгөөд энэ тохиолдолд HPLC аргыг ашиглах нь зүйтэй. Зөвхөн RF нь 350 нм (lmax=373, E1% 1cm=202 ба lmax=445 nm, E1% 1cm=243)-аас илүү өвөрмөц шингээлтийн мужтай тул спектрофотометрийн аргаар чанарын болон тоон шинжилгээ хийхийг санал болгосон.

Хүлээн авсан өгөгдөл дээр үндэслэн 5 бодисыг шинжлэх оновчтой ажлын долгионы уртыг сонгосон бөгөөд бүрэлдэхүүн хэсэг нь lopt = 206 нм (1-р зургийг үз). Энэ утга нь хольцын бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүдтэй харьцуулахад хамгийн бага өвөрмөц шингээлттэй (lmax = 206 нм E1% 1cm = 5.8) UC-ийн хэт ягаан туяаны спектрийн хамгийн их утга юм (хүснэгтийг үз).

Бэлтгэсэн бүх бодисууд нь ион шинж чанартай байдаг тул тэдгээрийн шинжилгээнд туйл биш суурин ба туйлтай хөдөлгөөнт фазуудыг ашиглан урвуу фазын хроматографийг ашиглах нь зүйтэй. Ионы нэгдлүүдийн урвуу фазын хроматографийн хувьд рН-ийн утга нь бие даасан бодисыг салгах үр ашигт ихээхэн нөлөөлдөг хүчин зүйлүүдийн нэг юм. Орчин үеийн урвуу фазын сорбентуудтай ажиллахдаа хөдөлгөөнт үе шатанд рН-ийн 2.0-аас 8.0 хүртэлх буфер уусмалыг ихэвчлэн ашигладаг. Сонгосон хамгийн оновчтой долгионы урт нь 206 нм тул хэт ягаан туяаны долгионы уртын мужид 200 нм-ээс дээш байрлал байхгүй тул фосфатын буфер ашиглах нь зүйтэй.

Өөр өөр рН-ийн утгууд дахь UC-ийн зан төлөвийг судлахын тулд түүний спектрийг рН 7.0 ба 2.6 фосфатын буфер уусмалд тэмдэглэв (Зураг 2). РН 2.6-д UC-ийн молекул хэлбэрийн гипохром нөлөө ажиглагдаж байна - шингээлт нь рН 7.0 спектртэй харьцуулахад 3 дахин буурдаг (энэ рН-ийн утгад UC-ийн диссоциаци бүрэн дарагддаг). Үүнийг харгалзан үзэхэд хөдөлгөөнт фазын рН-ийн оновчтой утга нь 7.0 байна. Дараа нь эмийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг салгах үр ашигт хөдөлгөөнт фазын найрлага, рН-ийн нөлөөллийг судлав. РН 2.6-д хольцыг бие даасан оргилууд болгон бүрэн салгасангүй - PC, Na, PG нь хуваагдаагүй бөгөөд эхлээд нэг оргил хэлбэрээр гарч ирдэг, дараа нь YaK ба Pb бие даасан оргил хэлбэрээр гарч ирдэг. рН 5.5-д мөн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг бүрэн салгахгүй. РН 7.0 үед хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг бүрэн салгасан. Бүх бодисууд дараах дарааллаар тусдаа оргил хэлбэрээр гарч ирэв: YAK, Pc, PG, NA, Pb. Гэсэн хэдий ч, салгах үйл явц удаан байдаг - 45-50 минут.

Хөдөлгөөнт фазын илүү их шингээлтийн хүчийг хангах, салгах процессыг хурдасгахын тулд түүний найрлагад бага туйлт органик уусгагчийг нэвтрүүлэх шаардлагатай. Сонгосон ажлын долгионы уртад (lopt = 206 нм) хэт ягаан туяаны тунгалаг байдлын хязгаарын дагуу HPLC-д уусгагч болгон ихэвчлэн ашигладаг уусгагчдаас бид тунгалаг байдлын хязгаар нь 195 ба 205 нм байдаг ацетонитрил ба метанолыг ашиглаж болно.

Хөдөлгөөнт үе шатанд 2%-ийн метанол оруулахад процессын хугацаа багассан боловч NA оргил нь тэгш бус өндөртэй, Pb оргил нь NA оргилын сүүлтэй давхцаж байв. Метанолын концентрацийг 1% хүртэл бууруулсны дараа Pb ба NA-ийн оргилууд давхцаагүй боловч NA оргилын тэгш бус байдал нэмэгдсэн. Үүнийг багасгахын тулд ацетонитрилийг 1% метанол агуулсан хөдөлгөөнт үе шатанд нэвтрүүлсэн.

Туршилтын үр дүнд хөдөлгөөнт фазыг сонгосон - 1% метанол, 0.5% ацетонитрил агуулсан рН 7.0 фосфатын буферээс бүрдэх усан-органик фаз нь бүх 5 бүрэлдэхүүн хэсгийг үр дүнтэй тусгаарлах боломжийг олгосон (Зураг 3). Энэ систем дэх хроматографийн нийт хугацаа 35 минут, бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хадгалах хугацаа нь ойролцоогоор (минутаар) байсан: YA - 5.3, Ps - 15, PG - 19.3, NA - 26, Rb - 31.

Тоон тодорхойлолтыг бие даасан бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн стандарт дээжийн уусмалыг ашиглан гадны стандарт аргаар хийсэн.

Санал болгож буй тоон тодорхойлох аргын хэмжилзүйн шинж чанарыг загвар хольцыг 5 давталтаар судалж, хүснэгтэд үзүүлэв.

Хүснэгтээс харахад "Аданол" эмэнд боловсруулсан аргыг ашиглан 95% -ийн найдвартай магадлалаар 3% -иас ихгүй харьцангуй алдаатай бүх 5 бүрэлдэхүүн хэсгийг тодорхойлох боломжтой.

Мансууруулах бодисын үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн оргил цэгүүдээс гадна дээр дурдсан нөхцлийн дагуу олж авсан хроматограмм нь анхны бодисуудад агуулагдах гипоксантин ба никотиний хүчлийн оргилууд, түүнчлэн Pb ба NA-ийн гидролизийн үед үүссэн оргилуудыг тус тус тодорхойлдог. Тиймээс боловсруулсан арга нь бэлдмэлийн эдгээр гадны хольцыг чанарын болон тоон байдлаар тодорхойлох боломжийг бидэнд олгодог.

дүгнэлт

1. Тодорхойлсон оновчтой нөхцөлолон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй холимог дахь HPLC аргыг ашиглан сукциний хүчлийн тоон шинжилгээ.

2. 3% -иас ихгүй тодорхойлох харьцангуй алдаатай "Аданол" эмийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд, түүний дотор хольцын чанарын болон тоон шинжилгээ хийх аргыг боловсруулсан.

Ашигласан уран зохиолын жагсаалт

1. М.А. Казмин, А.В. Михалев, A.P. Арзамасцев "BICILLIN-3" эмийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг HPLC-ээр тодорхойлох" // Эмийн сан - № 5 - 2002 - 5-6 хуудас.

2. Т.Х. Вергейчик, Н.С. Онегова "Пропифеназон агуулсан эмийн шинжилгээнд HPLC" // Эмийн сан - № 6 - 2002 - 13-16 хуудас.

3. А.Ю. Петров, С.А. Дмитриченко, А.Л. Коваленко, Л.Е. Алексеева "Аданол" эмийн стандартчилал // Эмийн сан - № 5 - 2002 - 11-13 хуудас.

Нэмэлт

1. Барам Г.И., Федорова Г.А. // Хүнс, микробиологи, эмнэлгийн салбарт хроматографийн хэрэглээ: Мат. Бүгд Conf. - Геленджик, 1990 - хуудас 43-44.

2. Кричковская Л.В., Черненкая Л.А. // Хүнс, микробиологи, эмнэлгийн салбарт хроматографийн хэрэглээ: Мат. Бүгд Conf. - Геленджик, 1990 оны 10-р сарын 8-12, М., 1990. - P.49.

3. Хроматографи: Аргын практик хэрэглээ: 2 хэсэгт. 2-р хэсэг - М.: Мир, 1986. - 422 х.

Оршил.

Сүүлийн 10 жилд шингэн хроматографийн хурдацтай хөгжил нь эрчимтэй хөгжиж байгаатай холбоотой онолын үндэсмөн түүний өндөр үр дүнтэй хувилбарыг практикт ашиглах, түүнчлэн шаардлагатай сорбент, тоног төхөөрөмжийг бий болгох, үйлдвэрийн аргаар үйлдвэрлэх.

Өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн (HPLC) нэг онцлог шинж чанар нь 3-10 микрон хэмжээтэй сорбентыг ашиглах явдал бөгөөд энэ нь маш өндөр салгах үр дүнтэй массын хурдан шилжилтийг баталгаажуулдаг.

Одоогийн байдлаар HPLC нь хийн хроматографаас ч давсан хөгжлийн хурдаараа багажийн аргуудын дунд нэгдүгээр байр эзэлж байна. Хийн хроматографитай харьцуулахад HPLC-ийн хамгийн чухал давуу тал нь бараг ямар ч объектыг физик-химийн шинж чанар, жишээлбэл буцлах цэг эсвэл молекул жинд ямар ч хязгаарлалтгүйгээр судлах чадвар юм.

Өнөөдөр HPLC нь шинжлэх ухаан, технологийн өргөн хүрээний салбарт өргөн хэрэглэгддэг маш сайн боловсруулсан багажийн арга юм. Үүний ач холбогдол нь биохими, молекул биологи, хүрээлэн буй орчны бохирдлын хяналт зэрэг чухал салбарууд, түүнчлэн химийн, нефтийн хими, хүнс, эмийн үйлдвэрүүдэд онцгой ач холбогдолтой юм.

арга зүйн дараах онцлогоос шалтгаалан маш тодорхой хэд хэдэн шаардлагыг харгалзан үзэх шаардлагатай тул.

А. HPLC баганууд нь маш жижиг ширхэгийн диаметртэй зөөвөрлөгчөөр савлагдсан байдаг. Үүний үр дүнд дээжийг хурдан салгахад шаардлагатай уусгагчийн эзлэхүүний хурдаар багана дээр өндөр даралт үүсдэг.

б. HPLC-д ашигладаг детекторууд нь шингэний урсгал ба даралтын (дуу чимээ) хэлбэлзэлд мэдрэмтгий байдаг. Түүнчлэн концентраци мэдрэгчийг ашиглах үед шингэний эзэлхүүний хурдыг илүү тогтвортой байлгах шаардлагатай.

В. Хроматографийн салгах үйл явц нь хэд хэдэн антагонист нөлөөг дагалддаг, жишээлбэл, хөдөлгөөнт үе шатанд дээжийг тараах нь тусгаарлагдсан бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг холиход хүргэдэг бөгөөд ялгарсан оргил дахь (детектор дахь) бодисын хамгийн их концентрацийг бууруулдаг. Тархалт нь дээжийг шахах цэгээс детектор хүртэлх системийн бүх хэсэгт ажиглагдаж байна.

г.Хөдөлгөөнт фазын үүрэг гүйцэтгэдэг уусгагч нь ихэвчлэн тоног төхөөрөмжийн зэврэлт үүсгэдэг. Энэ нь юуны түрүүнд урвуу фазын хроматографид хэрэглэгддэг уусгагчдад хамаатай бөгөөд биохимийн HPLC хэрэглээнд илүүд үздэг.

Эдгээр системийг боловсруулах, бүтээх, ажиллуулах явцад HPLC-ийн онцлогийг багажийн техник болгон харгалзан үзэх шаардлагатай. Хроматографийн систем, тэдгээрийн эд ангиудын арилжааны дээжийг бий болгохын тулд арав гаруй жилийн эрэл хайгуул, судалгааны ажлыг хангалттай найдвартай, энгийн, ашиглахад аюулгүй, үнэ болон техникийн үзүүлэлтүүдийн хооронд хүлээн зөвшөөрөгдсөн харьцаатай болгосон. Шинээр гарч ирж байна Сүүлийн үедЖижиг багана (урт ба диаметр хоёулаа) чиг хандлага нь багаж хэрэгсэлд шинэ шаардлагыг бий болгодог.

1.1. ҮР АШИГТАЙБАСОНГОЛТ

Хроматографи нь хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хооронд нь холбодоггүй хоёр фазын тэнцвэрийн тархалтын ялгаан дээр үндэслэн ялгах арга бөгөөд тэдгээрийн нэг нь хөдөлгөөнгүй, нөгөө нь хөдөлгөөнт байдаг. Дээжний бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь баганын дагуу хөдөлдөг. хөдөлгөөнт фаз ба тэдгээр нь хөдөлгөөнгүй үе шатанд байх үед байрандаа үлдэнэ.Хөдөлгөөнгүй фазын бүрэлдэхүүн хэсгийн хамаарал их байх тусам хөдөлгөөнт фазын хувьд бага байх тусам баганагаар удаан хөдөлж, дотор нь удаан хадгалагдана. Хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хөдөлгөөнгүй ба хөдөлгөөнт фазын хамаарлын ялгаанаас шалтгаалан хроматографийн үндсэн зорилгод хүрдэг - хольцыг хөдөлж буй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн бие даасан зурвас (оргил) болгон хуваах. хөдөлгөөнт фаз бүхий багана.

Эдгээрийн ерөнхий санаануудДээжийг нэвтрүүлэх үед баганад орж буй дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд, нэгдүгээрт, хөдөлгөөнт үе шатанд ууссан, хоёрдугаарт, суурин фазтай харилцан үйлчлэлцсэн (хадгалагдсан) тохиолдолд л хроматографийн аргаар ялгах боломжтой болох нь тодорхой байна. Хэрэв дээжийг нэвтрүүлэх үед аливаа бүрэлдэхүүн хэсэг нь уусмал хэлбэрээр байхгүй бол тэдгээрийг шүүж, хроматографийн процесст оролцохгүй. Үүний нэгэн адил хөдөлгөөнгүй фазтай харьцдаггүй бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь тэдгээрийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд хуваагдалгүйгээр хөдөлгөөнт фазтай баганаар дамжина.

Зарим хоёр бүрэлдэхүүн хэсэг нь хөдөлгөөнт үе шатанд уусдаг, хөдөлгөөнгүй фазтай харилцан үйлчилдэг, өөрөөр хэлбэл хроатографийн үйл явц ямар ч саадгүйгээр явагдах нөхцөлийг хүлээн авцгаая. Энэ тохиолдолд хольцыг баганаар дамжуулсны дараа та хэлбэрийн хроматограммыг авч болно а, бэсвэл В(Зураг 1.1). Эдгээр хроматограммууд нь үр ашгийн хувьд ялгаатай хроматографийн тусгаарлалтыг дүрсэлдэг (Аб) тэнцүү сонгомол, сонгомол (бТэгээд V)тэнцүү үр ашигтай.

Нэг хадгалах хугацаанд олж авсан оргил нь нарийхан байх тусам баганын үр ашиг өндөр байна. Баганын үр ашгийг онолын хавтангийн тоогоор хэмждэг (NPT) Н: үр ашиг өндөр байх тусам

Цагаан будаа. 1.2. Хроматографийн оргил параметрүүд ба онолын хавтангийн тоог тооцоолох:

т Р - хадгалах дээд хугацаа; h - оргил өндөр; Wj/j - оргилын өргөн нь түүний өндрийн хагаст

Цагаан будаа. 1.1. Баганын үр ашиг, сонгомол чанараас хамааран хроматограммын төрөл:

А- хэвийн сонгомол байдал, үр ашгийг бууруулсан (онолын ялтсууд цөөн); b - ердийн сонголт, үр ашиг; V -хэвийн үр ашиг, нэмэгдсэн сонгомол (бүрдэл хэсгүүдийг хадгалах хугацааны өндөр харьцаа)

үр ашиг, FTT их байх тусам баганыг дайран өнгөрөхөд анх удаа нарийссан зурвасын оргилын тэлэлт багасч, баганын гарц дахь оргил нь нарийсдаг. PTT нь хөдөлгөөнт болон суурин үе шатуудын хооронд тэнцвэрийг бий болгох алхамуудын тоог тодорхойлдог.

Нэг баганад онолын хавтангийн тоо, баганын уртыг мэдэх Л (мкм), түүнчлэн сорбентын ширхэгийн дундаж диаметр г в (мкм) бол онолын хавтан (HETT) -тэй тэнцэх өндрийн утгыг, мөн онолын хавтантай (RHETT) тэнцүү бууруулсан өндрийн утгыг авахад хялбар байдаг:

BETT = Л/ Н

PVETT =B3TT/d c .

FTT, HETT, PHETT-ийн утгуудтай тул янз бүрийн төрөл, өөр өөр урттай, янз бүрийн шинж чанар, мөхлөгт сорбентоор дүүргэсэн баганын үр ашгийг хялбархан харьцуулж болно. Ижил урттай хоёр баганын PTT-ийг харьцуулах замаар тэдгээрийн үр ашгийг харьцуулна. HETP-ийг харьцуулахдаа ижил хэмжээтэй, өөр өөр урттай сорбент бүхий баганыг харьцуулна. Эцэст нь, PVETT-ийн утга нь ямар ч хоёр баганад сорбентын чанар, нэгдүгээрт, багануудыг дүүргэх чанар, хоёрдугаарт, баганын уртаас үл хамааран түүний шинж чанартай сорбентуудын мөхлөгт байдлыг үнэлэх боломжийг олгодог.

Баганын сонгомол байдал нь хроматографийн тусгаарлалтанд хүрэхэд ихээхэн үүрэг гүйцэтгэдэг.

Баганын сонгомол байдал нь олон хүчин зүйлээс хамаардаг бөгөөд туршилтын ур чадвар нь салгах сонгомол байдалд нөлөөлөх чадвараас ихээхэн хамаардаг. Үүний тулд хроматографчийн гарт маш чухал гурван хүчин зүйл байдаг: сорбентийн химийн шинж чанарыг сонгох, уусгагч ба түүний хувиргагчийн найрлагыг сонгох, тусгаарлагдсан бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн химийн бүтэц, шинж чанарыг харгалзан үзэх. . Заримдаа хөдөлгөөнт болон суурин фазын хоорондох бодисын тархалтын коэффициентийг өөрчилдөг баганын температурын өөрчлөлт нь сонгомол байдалд мэдэгдэхүйц нөлөө үзүүлдэг.

Хроматограмм дахь хоёр бүрэлдэхүүн хэсгийг салгах талаар авч үзэх, үнэлэхэд нарийвчлал нь чухал үзүүлэлт юм. R s, Энэ нь салангид хэсгүүдийн гаралтын хугацаа болон оргил өргөнтэй холбоотой

Оргил тусгаарлалтыг тодорхойлсон параметрийн нарийвчлал нь сонгох чадвар нэмэгдэхийн хэрээр тоологчийн өсөлтөөр тусгагдсан бөгөөд үр ашиг нь нэмэгддэг бөгөөд энэ нь оргилуудын өргөн багассаны улмаас хуваагчийн утгын бууралтаар илэрхийлэгддэг. Тиймээс шингэн хроматографийн хурдацтай ахиц дэвшил нь "өндөр даралтын шингэн хроматографи" гэсэн ойлголтыг өөрчлөхөд хүргэсэн бөгөөд үүнийг "өндөр нарийвчлалтай шингэн хроматографи" гэж сольсон (англи хэл дээрх нэр томъёоны товчилсон хэлбэр хадгалагдан үлдсэн). HPLC орчин үеийн шингэн хроматографийн хөгжлийн чиглэлийг хамгийн зөв тодорхойлсон).

Тиймээс илүү нарийн ширхэгтэй сорбент, илүү жигд найрлагатай (нарийн фракц), баганад илүү нягт, жигд савлаж, илүү нимгэн залгаастай фазын давхарга, бага наалдамхай уусгагч, оновчтой урсгалын хурдыг ашиглах үед баганын угаалт багасч, үр ашиг нэмэгддэг.

Гэсэн хэдий ч баганад ялгах явцад хроматографийн бүсийн зурвас бүдгэрэхийн зэрэгцээ дээжийг нэвтрүүлэх төхөөрөмж, холбогч хялгасан судасны форсунк - багана ба багана - илрүүлэгч, детекторын үүр болон зарим хэсэгт угааж болно. туслах төхөөрөмж (инжекторын дараа суурилуулсан дээжээс механик тоосонцорыг барих бичил шүүлтүүр, урьдчилсан багана, ороомгийн реактор гэх мэт) - Оргилын хадгалагдсан эзэлхүүнтэй харьцуулахад баганын нэмэлт эзэлхүүн их байх тусам элэгдэл их болно. Үхсэн эзэлхүүн хаана байрлаж байгаа нь бас чухал: хроматографийн дохио нарийссан байх тусам үхсэн эзэлхүүн бүдгэрнэ. Тиймээс хроматографийн хроматографийн бүс нь хамгийн нарийхан (форсункаас багана хүртэлх инжектор ба төхөөрөмж) хэсгийн дизайнд онцгой анхаарал хандуулах хэрэгтэй - энд баганын гаднах элэгдэл нь хамгийн аюултай бөгөөд хамгийн их нөлөө үзүүлдэг. Хэдийгээр сайн зохион бүтээгдсэн хроматографуудад баганын нэмэлт шингэрүүлэлтийн эх үүсвэрийг хамгийн бага хэмжээнд хүртэл бууруулах ёстой гэж үздэг ч шинэ төхөөрөмж бүр, хроматографын өөрчлөлт бүрийг заавал баганад туршилт хийж, үүссэн хроматограммыг харьцуулах замаар дуусгах ёстой. нэг паспорттой. Хэрэв дээд зэргийн гажуудал эсвэл үр ашгийн огцом бууралт ажиглагдвал системд шинээр нэвтрүүлсэн хялгасан судас болон бусад төхөөрөмжийг сайтар шалгаж үзэх хэрэгтэй.

Баганын гадуур угаах ба түүний буруу дүгнэлт нь өндөр хурдны HPLC, микро багана HPLC болон орчин үеийн HPLC-ийн бусад хувилбаруудад харьцангуй хуучирсан хроматографуудыг ашиглахыг оролдсон тохиолдолд үр ашгийн мэдэгдэхүйц (50% -иас дээш) алдагдахад хүргэдэг. микроинжекторууд, хамгийн бага урттай 0.05-0.15 мм голчтой дотоод хялгасан судсыг холбогч, 10-1000 мкл багтаамжтай багана, 0.03-1 мкл багтаамжтай микрокюветт бүхий детектор, өндөр хурдтай, өндөр хурдтай бичигч, интеграторууд .

1.2. УУСГАГЧИЙГ ХАДГАЛАХ, БҮЧТЭЙ

Шинжлэх бодисыг багана дээр ялгахын тулд дээр дурдсанчлан хүчин чадлын коэффициент к" 0-ээс их байх ёстой, өөрөөр хэлбэл хөдөлгөөнгүй фаз буюу сорбент нь бодисыг хадгалах ёстой. Гэсэн хэдий ч хүлээн зөвшөөрөгдөх шингэний хугацааг авахын тулд хүчин чадлын хүчин зүйл хэт өндөр байх ёсгүй. Хэрэв өгөгдсөн бодисын хольцын хувьд тэдгээрийг хадгалах хөдөлгөөнгүй фазыг сонгосон бол шинжилгээний аргачлалыг боловсруулах цаашдын ажил нь бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хувьд ялгаатай, гэхдээ тийм ч том биш уусгагчийг сонгох явдал юм. к". Энэ нь уусгагчийн ялгаралтын хүчийг өөрчлөх замаар хийгддэг.

Цахиурт гель эсвэл хөнгөн цагаан исэлд шингээх хроматографийн хувьд хоёр бүрэлдэхүүн хэсэгтэй уусгагчийн хүчийг (жишээлбэл, изопропанол нэмсэн гексан) туйлын бүрэлдэхүүн хэсгийн (изопропанол) агууламжийг нэмэгдүүлэх замаар нэмэгдүүлдэг. эсвэл изопропанолын агууламжийг бууруулах замаар бууруулна. Хэрэв агуулагдах туйлын бүрэлдэхүүн хэсэг нь хэт бага (0.1% -иас бага) бол түүнийг илүү сул уусмалаар солих хэрэгтэй. Энэ систем нь холимог дахь сонирхлын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хувьд хүссэн сонгомол байдлыг хангаж чадахгүй байсан ч туйл эсвэл туйлшгүй бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг өөр зүйлээр сольж, ижил зүйлийг хийдэг. Уусгагч системийг сонгохдоо хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн уусах чадвар, янз бүрийн зохиогчдын эмхэтгэсэн элуотропын цуврал уусгагчийг хоёуланг нь харгалзан үздэг.

Уусгагчийн хүчийг залгагдах туйлын фазуудыг (нитрил, амин, диол, нитро гэх мэт) ашиглахдаа боломжит химийн урвалыг харгалзан, үе шатанд аюултай уусгагчийг (жишээлбэл, кетон гэх мэт) оруулахгүйгээр ойролцоогоор ижил аргаар сонгоно. амин фаз).

Урвуу фазын хроматографийн хувьд уусгагч бодис дахь органик бүрэлдэхүүн хэсгийн агууламжийг (метанол, ацетонитрил эсвэл THF) нэмэгдүүлэх замаар уусгагчийн хүчийг нэмэгдүүлж, илүү их ус нэмснээр бууруулна. Хэрэв хүссэн сонгомол байдалд хүрэх боломжгүй бол тэд өөр органик бүрэлдэхүүн хэсгийг ашиглах эсвэл янз бүрийн нэмэлтүүд (хүчил, ион хос урвалж гэх мэт) ашиглан өөрчлөхийг оролддог.

Ион солилцооны хроматографи ашиглан ялгахдаа буферийн уусмалын концентрацийг нэмэгдүүлэх, багасгах эсвэл рН-ийг өөрчлөх замаар уусгагчийн хүчийг өөрчилдөг бөгөөд зарим тохиолдолд органик бодисоор өөрчлөх аргыг ашигладаг.

Гэсэн хэдий ч, ялангуяа байгалийн болон биологийн нийлмэл хольцын хувьд уусгагчийн хүчийг сонгохдоо дээжийн бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг хүлээн зөвшөөрөгдсөн хугацаанд ялгахаар сонгох боломжгүй байдаг. Дараа нь та градиент элюцийг ашиглах хэрэгтэй, өөрөөр хэлбэл, уусмалын хүч нь шинжилгээний явцад өөрчлөгддөг уусгагчийг ашиглах хэрэгтэй бөгөөд ингэснээр урьдчилан тодорхойлсон хөтөлбөрийн дагуу байнга нэмэгддэг. Энэхүү техник нь нарийн төвөгтэй хольцын бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг харьцангуй богино хугацаанд цэвэрлэж, нарийн оргил хэлбэрээр бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд хуваах боломжийг олгодог.

1.3. СОРБЕНТИЙН БӨӨМИЙН ХЭМЖЭЭ, нэвчүүлэх чадвар, үр ашиг

Баганын элэгдлийг харгалзан бид баганын үр ашиг (HETT) нь сорбентийн хэсгүүдийн хэмжээнээс хамаарна гэдгийг харуулсан. Сүүлийн 10-12 жилийн хугацаанд HPLC-ийн хурдацтай хөгжил нь нэгдүгээрт, 3-10 микрон хэмжээтэй, нарийн бутархай найрлагатай сорбент үйлдвэрлэх аргыг боловсруулж, өндөр үр ашигтайгаар хангасантай холбоотой юм. нэвчилт, хоёрдугаарт, эдгээр сорбентоор баганыг дүүргэх боловсруулах арга, гуравдугаарт, бага эзэлхүүний оргилыг бүртгэх чадвартай өндөр даралтын насос, инжектор, жижиг эзэлхүүнтэй кювет бүхий детектор бүхий шингэн хроматографийг боловсруулж, цувралаар үйлдвэрлэх.

Сайн савласан зутангаар савласан баганын хувьд 3, 5, 10 эсвэл 20 мкм хэмжээтэй хэсгүүдийг савлахад ашиглаж байгаагаас үл хамааран багассан эквивалент онолын хавтангийн өндөр (LPHE) нь 2 байж болно. Энэ тохиолдолд бид 41670, 25000, 12500, 6250 тонн үр ашигтай багана (стандарт урт нь 250 мм) тус тус хүлээн авна. 3 μм тоосонцор бүхий хамгийн үр дүнтэй баганыг сонгох нь зүйн хэрэг юм шиг санагддаг. Гэсэн хэдий ч одоо байгаа насос нь уусгагчийг ийм баганаар өндөр эзлэхүүний хурдаар шахах боломжтой тул энэ үр ашиг нь маш өндөр даралтын ажиллагаа, харьцангуй бага ялгах хурдтай байх болно. Энд бид сорбентын ширхэгийн хэмжээ, баганын үр ашиг, нэвчилт хоорондын хамаарлын тухай асуулттай тулгардаг.

Хэрэв бид баганын эсэргүүцлийн хүчин зүйлийг эндээс - хэмжээсгүй хэмжигдэхүүнийг илэрхийлбэл дараах тэгшитгэлийг олж авна.

Ижил төрлийн бичил хэсгүүдээр дүүргэсэн баганын эсэргүүцлийн коэффициент нь ижил аргаар бага зэрэг ялгаатай бөгөөд дараах утгатай байна.

Бөөмийн төрөл "... Тогтмол бус бөмбөрцөг

хэлбэрийн хэлбэр

Хуурай савлагаа. . . . . 1000-2000 800-1200

Түдгэлзүүлсэн сав баглаа боодол. . . 700-1500 500-700

Баганын оролтын даралт нь урсгалын шугаман хурд, баганын татах хүчин зүйл, уусгагчийн зуурамтгай чанар, баганын урттай пропорциональ ба бөөмийн диаметрийн квадраттай урвуу хамааралтай байна.

Дээрх хамаарлыг 3, 5, 10, 20 мкм диаметртэй тоосонцортой дээр дурдсан баганад хэрэглэж, тогтмол шугаман урсгалын хурд, баганын эсэргүүцлийн хүчин зүйл, уусгагчийн зуурамтгай чанарыг тооцвол бид оролтын даралтын харьцаа 44:16:4:1 болно. ижил урттай баганын хувьд. Тиймээс хэрэв метанол уусгагч системийг ашиглах үед 10 мкм ширхэгийн хэмжээтэй урвуу фазын сорбент - . ус (70:30) ихэвчлэн стандарт багана дээр уусгагчийн урсгалын хурд 1 мл/мин, баганын үүдэнд даралт нь 5 МПа, дараа нь 5 мкм - 20 МПа, 3 мкм - 55 МПа байна. . Цахиурт гель болон бага наалдамхай уусгагч систем, гексан-изопропанол (100:2) хэрэглэх үед утга нь мэдэгдэхүйц бага байх болно: 1, 4, 11 МПа тус тус. Хэрэв урвуу фазын сорбентийн хувьд 3 мкм хэмжээтэй тоосонцорыг ашиглах нь маш их асуудалтай бөгөөд 5 мкм боломжтой боловч бүх төхөөрөмжид байдаггүй бол ердийн фазын сорбентын хувьд даралттай холбоотой асуудал гардаггүй. Орчин үеийн өндөр хурдны HPLC нь дээрх жишээнээс илүү уусгагчийн урсгалын хурдыг ихэвчлэн ашигладаг тул даралтын шаардлага улам нэмэгддэг гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй.

Гэсэн хэдий ч, салгахад тодорхой тооны онолын ялтсууд шаардлагатай бөгөөд хурдны дүн шинжилгээ хийх нь зүйтэй бол зураг бага зэрэг өөрчлөгддөг. Ижил үр ашигтай 3, 5, 10 микрон хэмжээтэй сорбент бүхий баганын урт нь тус тус 7.5 байх болно; 12.5 ба 25 см, дараа нь баганын оролт дахь даралтын харьцаа 3: 2: 1 болж өөрчлөгдөнө. Үүний дагуу ижил үр ашигтай багана дээрх шинжилгээний үргэлжлэх хугацаа нь 0.3: 0.5: 1 харьцаатай байх болно, өөрөөр хэлбэл 10-аас 5 ба 3 микрон руу шилжих үед шинжилгээний үргэлжлэх хугацаа 2 ба 3.3 дахин багасна. Энэхүү илүү хурдан дүн шинжилгээ нь баганын оролтын пропорциональ өндөр даралтын зардлаар хийгддэг.

Үзүүлсэн өгөгдөл нь янз бүрийн ширхэгийн хэмжээтэй сорбентууд нь ижил ширхэгийн хэмжээтэй тархалтын муруйтай, баганууд нь ижил аргаар савлагдсан, баганын эсэргүүцлийн коэффициенттэй байх тохиолдолд хүчинтэй байна. Бөөмийн хэмжээ багасах тусам сорбентын нарийн фракцыг олж авахад хүндрэл нэмэгддэг гэдгийг санах нь зүйтэй. Янз бүрийн үйлдвэрлэгчдийн фракцууд нь өөр өөр бутархай найрлагатай байдаг. Тиймээс баганын эсэргүүцлийн коэффициент нь үр тарианы хэмжээ, сорбентийн төрөл, баганын савлах арга гэх мэтээс хамаарч өөр өөр байх болно.

HPLC АРГЫН АНГИЛАЛ САЛДАХ МЕХАНИЗМ

HPLC-ийн хийсэн ихэнх тусгаарлалт нь бодисыг сорбенттой харьцах холимог механизм дээр суурилж, баганын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг их эсвэл бага хэмжээгээр хадгалах боломжийг олгодог. Илүү их эсвэл бага цэвэр хэлбэрээр салгах механизм нь практикт маш ховор байдаг, жишээлбэл, үнэрт нүүрсустөрөгчийг ялгахад туйлын усгүй цахиурын гель, усгүй гексан ашиглах үед шингээх.

Янз бүрийн бүтэц, молекул жинтэй бодисыг хадгалах холимог механизмын тусламжтайгаар шингээлт, тархалт, хасах болон бусад механизмыг хадгалахад оруулсан хувь нэмрийг үнэлэх боломжтой. Гэсэн хэдий ч HPLC дахь салгах механизмыг илүү сайн ойлгох, ойлгохын тулд тодорхой төрлийн хроматограф, жишээлбэл, ион солилцооны хроматографитай холбоотой нэг буюу өөр механизм давамгайлсан тусгаарлалтыг авч үзэхийг зөвлөж байна.

2.1.1 АДСОРБЦИЙН ХРОМАТОГРАФИ

Адсорбцийн хроматографийн аргаар тусгаарлах нь гадаргуу дээр идэвхтэй төвтэй цахиур гель эсвэл хөнгөн цагаан исэл зэрэг шингээгч бодисуудтай харилцан үйлчлэлийн үр дүнд хийгддэг. Янз бүрийн дээжийн молекулуудын шингээх төвүүдтэй харилцан үйлчлэх чадварын ялгаа нь баганын дагуу хөдөлгөөнт фазтай хөдөлгөөн хийх явцад тэдгээрийг бүс болгон хуваахад хүргэдэг. Энэ тохиолдолд олж авсан бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн бүсийг тусгаарлах нь уусгагч ба шингээгчтэй харилцан үйлчлэхээс хамаарна.

Гидроксил бүлэг агуулсан шингээгчийн гадаргуу дээрх сорбци нь шингээгчийн туйлын гадаргуу ба туйлшрал (эсвэл туйлшрах) бүлэг эсвэл молекулын хэсгүүдийн хоорондох тодорхой харилцан үйлчлэлд суурилдаг. Ийм харилцан үйлчлэлд байнгын эсвэл өдөөгдсөн диполуудын хоорондох диполь-диполь харилцан үйлчлэл, устөрөгчийн холбоо үүсэх, r-комплекс эсвэл цэнэг шилжүүлэх цогцолбор үүсэх хүртэл орно. Практик ажилд боломжтой бөгөөд нэлээд түгээмэл тохиолддог зүйл бол химийн сорбцийн илрэл бөгөөд энэ нь хадгалах хугацааг мэдэгдэхүйц нэмэгдүүлэх, үр ашгийг огцом бууруулах, задралын бүтээгдэхүүн гарч ирэх эсвэл бодисын эргэлт буцалтгүй сорбцод хүргэдэг.

Бодисын шингээх изотермууд нь шугаман, гүдгэр эсвэл хотгор хэлбэртэй байдаг. Шугаман шингээлтийн изотермийн үед бодисын оргил нь тэгш хэмтэй байх ба хадгалах хугацаа нь дээжийн хэмжээнээс хамаардаггүй. Ихэнх тохиолдолд бодисын шингээх изотермууд нь шугаман бус бөгөөд гүдгэр хэлбэртэй байдаг бөгөөд энэ нь сүүл үүсэх замаар оргилын зарим тэгш бус байдалд хүргэдэг.

HPLC-д хамгийн өргөн хэрэглэгддэг нь янз бүрийн нүх сүвний хэмжээ, гадаргуугийн талбай, нүхний диаметр бүхий цахиурлаг гель шингээгч юм. Хөнгөн цагааны ислийг маш бага ашигладаг бөгөөд сонгодог багана ба нимгэн давхаргын хроматографид өргөн хэрэглэгддэг бусад шингээгчийг маш ховор ашигладаг. Үүний гол шалтгаан нь бусад ихэнх шингээгч бодисуудын механик хүч чадал хангалтгүй байдаг бөгөөд энэ нь HPLC-ийн онцлог шинж чанартай өндөр даралтын үед тэдгээрийг савлах, ашиглахыг зөвшөөрдөггүй.

Шингээлт үүсгэдэг туйлын бүлгүүд нь цахиурын гель, хөнгөн цагаан ислийн гадаргуу дээр байрладаг. Тиймээс ихэвчлэн бодисын хольцыг ялгаруулах дараалал ба элуотропын цуврал уусгагч нь тэдгээрийн хувьд ижил байдаг. Гэсэн хэдий ч цахиурлаг гель ба хөнгөн цагаан оксидын химийн бүтцийн ялгаа нь заримдаа сонгомол байдлын ялгаатай байдалд хүргэдэг - дараа нь тухайн тодорхой ажилд илүү тохиромжтой нэг буюу өөр шингээгчийг илүүд үздэг. Жишээлбэл, хөнгөн цагааны исэл нь тодорхой олон цөмийн үнэрт нүүрсустөрөгчийг ялгахад илүү их сонголт өгдөг.

Хөнгөн цагааны исэлтэй харьцуулахад цахиурлаг гелийг ихэвчлэн илүүд үздэг нь сүвэрхэг чанар, гадаргуу болон нүхний диаметрийн хувьд цахиурлаг гелийг илүү өргөн сонголттойгоор тайлбарлаж, хөнгөн цагаан ислийн катализаторын идэвхжил мэдэгдэхүйц өндөр байдаг нь шинжилгээний үр дүнг гажуудуулахад хүргэдэг. дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн задрал эсвэл тэдгээрийн эргэлт буцалтгүй химисорбцын улмаас .

2.1.2 Адсорбцийн хроматографийн хэрэглээг хязгаарласан сул тал

HPLC аргыг хөгжүүлэхийн хэрээр шингээлтийн хроматографийн алдар нэр аажмаар буурч, залгаастай сорбент дээрх урвуу фазын болон хэвийн фазын HPLC гэх мэт бусад сонголтуудаар солигдох нь улам бүр нэмэгдсээр байна. Адсорбцийн хроматографийн сул тал нь юунд хүргэсэн бэ?

Юуны өмнө энэ нь шингээгч бодисыг ул мөр хэмжээгээр ус агуулсан уусгагч бодисоор тэнцвэржүүлэх үйл явцын урт хугацаа, ийм уусгагчийг тодорхой, давтагдах чийгшилтэй бэлтгэхэд бэрхшээлтэй байдаг. Энэ нь хадгалалт, нягтрал, сонгомол байдлын параметрүүдийн давтагдах чадвар мууд хүргэдэг. Үүнтэй ижил шалтгаанаар градиент элюцийг ашиглах боломжгүй - анхны төлөв рүү буцах нь маш урт бөгөөд энэ нь градиент ашиглан авсан хугацаанаас ихээхэн давсан байна.

Катализд мэдрэмтгий нэгдлүүдийг дахин зохион байгуулах, тэдгээрийн задрал, эргэлт буцалтгүй сорбци зэрэгтэй холбоотой шингээгч бодис, ялангуяа хөнгөн цагаан оксидын мэдэгдэхүйц сул талуудыг сайн мэддэг бөгөөд уран зохиолд олон удаа тэмдэглэсэн байдаг. Баганын эхний хэсэгт хуримтлагдах эргэлт буцалтгүй шингээгдсэн бодисууд нь сорбентийн шинж чанарыг өөрчилдөг бөгөөд баганын эсэргүүцлийг нэмэгдүүлэх эсвэл бүрмөсөн бөглөрөхөд хүргэдэг. Сүүлчийн сул талыг урьдчилан багана ашиглан арилгаж болно -Эсэргүүцэл, бөглөрөл ихсэх тусам түүнийг шинээр солих* эсвэл шинэ сорбентоор дүүргэнэ. Гэсэн хэдий ч энэ тохиолдолд мөн тохиолддог эргэлт буцалтгүй сорбци нь сорбци эсвэл катализаторын задралд мэдрэмтгий дээжийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд бүрэн эсвэл хэсэгчлэн байхгүй хроматограмм үүсгэдэг.

2.2. ТАРХАЛТЫН ХРОМАТОГРАФИ

Хуваалтын хроматографи нь HPLC-ийн хувилбар бөгөөд хольцыг бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд хуваах нь уусгагч (хөдөлгөөнт фаз) ба сорбент дээрх фаз (хөдөлгөөнт фаз) гэсэн хоёр холилдохгүй фазын тархалтын коэффициентүүдийн зөрүүгээс шалтгаалан хийгддэг. Түүхийн хувьд эхнийх нь энэ төрлийн сорбентууд байсан бөгөөд эдгээрийг шингэний фазыг (оксидипропионитрил, парафины тос гэх мэт) сүвэрхэг тулгуур дээр түрхэх замаар олж авсан бөгөөд энэ нь сорбентуудыг хий-шингэн хроматографид (GLC) хэрхэн бэлтгэдэг байсантай адил юм. Гэсэн хэдий ч ийм сорбентуудын сул талууд нэн даруй илчлэгдсэн бөгөөд гол нь фазыг зөөвөрлөгчөөс харьцангуй хурдан зайлах явдал байв. Үүний улмаас баганын фазын хэмжээ аажмаар буурч, хадгалах хугацаа нь багасч, баганын эхний хэсэгт фазад хамрагдаагүй шингээлтийн төвүүд гарч ирэн оргил сүүл үүсэх шалтгаан болсон. Энэхүү сул тал нь уусгагчийг баганад орохоос өмнө түрхсэн фазаар дүүргэх замаар тэмцсэн. Илүү наалдамхай, бага уусдаг полимер фазуудыг ашиглах үед оролт багассан боловч энэ тохиолдолд зузаан полимер хальснаас тархах хүндрэлтэй тул баганын үр ашиг мэдэгдэхүйц буурсан байна.

Шингэн фазыг химийн холбоогоор дамжуулан зөөвөрлөгч рүү залгах нь физикийн хувьд боломжгүй болж, өөрөөр хэлбэл тээвэрлэгч ба фазыг нэг болгон залгагдах фазын сорбент болгон хувиргах нь логик юм.

Судлаачдын дараагийн хүчин чармайлт нь залгаас нь нэлээд хурдан бөгөөд бүрэн явагдаж, үүссэн холбоо нь аль болох тогтвортой байх урвалжуудыг хайж олоход чиглэв. Ийм урвалжууд нь алкилхлоросилан ба тэдгээрийн деривативууд байсан бөгөөд энэ нь ижил төстэй технологийг ашиглан гадаргуу дээр янз бүрийн төрлийн, өөр өөр туйлт ба туйлшгүй бүлгүүдтэй залгаас фазын сорбент авах боломжийг олгосон.

Сүүлийн төрлийн сорбентыг HPLC-д амжилттай ашигласан нь олон төрлийн үйлдвэрлэгчдийн үйлдвэрлэлийг нэмэгдүүлэхэд хувь нэмэр оруулсан. Компани бүр ийм сорбентыг дүрмээр бол өөрийн төрлийн цахиур гель, өөрийн технологийг ашиглан үйлдвэрлэдэг бөгөөд энэ нь ихэвчлэн үйлдвэрлэлийн "ноу-хау" юм. Үүний үр дүнд химийн хувьд яг адилхан гэж нэрлэгддэг олон тооны сорбентууд (жишээлбэл, октадецилан залгагдсан цахиурлаг гель) нь маш өөр хроматографийн шинж чанартай байдаг. Энэ нь цахиурлаг гель нь илүү өргөн эсвэл нарийхан нүхтэй, өөр гадаргуутай, сүвэрхэг чанар, залгагдахаас өмнө түүний гадаргуу нь гидроксилжсэн эсвэл үгүй, моно-, ди- эсвэл трихлоросилантай, залгах нөхцөл нь мономер, полимер, эсвэл холимог давхаргын үе шатанд үлдэгдэл урвалжуудыг арилгахын тулд өөр өөр аргуудыг ашигладаг, силанол болон бусад идэвхтэй бүлгүүдийг нэмэлт идэвхгүй болгох эсвэл ашиглахгүй байж болно.

Урвалж залгах, түүхий эд, материал бэлтгэх технологийн нарийн төвөгтэй байдал, түүний олон үе шаттай шинж чанар нь нэг үйлдвэрлэлийн компаниас ижил технологи ашиглан олж авсан сорбентуудын багц хүртэл хроматографийн шинж чанараас арай өөр байж болно. Энэ нь ялангуяа ийм сорбентыг функциональ бүлгүүдийн тоо, байрлал, үйл ажиллагааны төрлөөр эрс ялгаатай бодис агуулсан олон бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хольцыг шинжлэхэд ашигладаг тохиолдолд үнэн юм.

Дээр дурдсан зүйлийг харгалзан уран зохиолд тайлбарласан шинжилгээний аргыг ашиглахдаа ижил сорбент, ижил үйл ажиллагааны нөхцлийг ашиглахыг үргэлж хичээх хэрэгтэй. Энэ тохиолдолд бүтээлийг хуулбарлахгүй байх магадлал хамгийн бага байна. Хэрэв энэ боломжгүй, гэхдээ ижил төстэй залгаастай өөр компаниас сорбент авсан бол техникийг дахин боловсруулахад удаан хугацаа шаардагдах тул бэлтгэлтэй байх хэрэгтэй. Үүний зэрэгцээ, энэ сорбентыг удаан хугацаанд боловсруулсны дараа ч гэсэн шаардлагатай салгахад хүрэхгүй байх магадлалтай (мөн үүнийг анхаарч үзэх хэрэгтэй). Утга зохиолд удаан хугацаанд үйлдвэрлэгдсэн хуучин сорбентыг ялгах олон аргууд байдаг нь тэдний цаашдын үйлдвэрлэл, хэрэглээг идэвхжүүлдэг. Гэсэн хэдий ч анхны аргуудыг боловсруулахад шилжих шаардлагатай байгаа тохиолдолд, ялангуяа задрах, химисорбц, дахин зохион байгуулалтад өртөмтгий бодисуудтай холбоотойгоор сүүлийн үед боловсруулж, шинэ, сайжруулсан сорбентуудыг ашиглан үйлдвэрлэсэн сорбент дээр ажиллаж эхлэх нь зүйтэй. технологийн хувилбарууд. Шинэ сорбентууд нь илүү жигд бутархай найрлагатай, залгагдах үетэй илүү жигд, бүрэн гадаргууг бүрхэж, сорбент боловсруулалтын илүү дэвшилтэт эцсийн шаттай байдаг.

2.3. ИОН СОЛИЛЦОХ ХРОМАТОГРАФИ

Ион солилцооны хроматографийн хувьд хольцын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг салгах нь ионжуулагч бодисыг сорбентын ионы бүлгүүдтэй урвуу харилцан үйлчлэлцэх замаар гүйцэтгэдэг. Сорбентийн цахилгаан саармаг байдлыг хадгалах нь гадаргуутай ойрхон байрладаг ион солилцох чадвартай эсрэг ионууд байгаатай холбоотой юм. Оруулсан дээжийн ион нь сорбентын тогтмол цэнэгтэй харилцан үйлчилж, эсрэг ионтой солилцдог. Тогтмол цэнэгтэй харилцан адилгүй бодисуудыг анион солилцогч эсвэл катион солилцуур дээр тусгаарладаг.Анион солилцуурууд нь гадаргуу дээр эерэг цэнэгтэй бүлгүүдтэй бөгөөд хөдөлгөөнт фазаас анионуудыг сорбдог.Үүний дагуу катион солилцогч нь катионуудтай харилцан үйлчилдэг -сөрөг цэнэгтэй бүлгүүдийг агуулдаг.

Хөдөлгөөнт фазын хувьд хүчил, суурь, шингэн аммиак зэрэг уусгагчийн давсны усан уусмалыг, өөрөөр хэлбэл өндөр диэлектрик тогтмол e, нэгдлүүдийг ионжуулах хандлагатай уусгагч системийг ашигладаг.Тэд ихэвчлэн рН-ийг зөвшөөрдөг буфер уусмалуудтай ажилладаг. үнэ цэнийг тохируулах.

Хроматографийн аргаар салгах явцад анализаторын ионууд нь шингээгч дэх ионуудтай өрсөлдөж, сорбентын эсрэг цэнэгтэй бүлгүүдтэй харьцах хандлагатай байдаг. Үүнээс үзэхэд ион солилцооны хроматографийг ямар нэгэн байдлаар ионжуулж болох аливаа нэгдлүүдийг ялгахад ашиглаж болно. Төвийг сахисан элсэн чихрийн молекулуудыг борат ионуудтай цогцолбор хэлбэрээр шинжлэх боломжтой.

Sugar + VO 3 2 - = Sugar -VO 3 2 -.

Ион солилцооны хроматограф нь өндөр туйлттай бодисыг салгахад зайлшгүй шаардлагатай бөгөөд үүнийг дериватив болгон хувиргахгүйгээр GLC-ээр шинжлэх боломжгүй юм. Эдгээр нэгдлүүдэд амин хүчил, пептид, сахар орно.

Ион солилцооны хроматографийг анагаах ухаан, биологи, биохими, хүрээлэн буй орчны хяналт, цус, шээсэнд агуулагдах эм, тэдгээрийн метаболит, хүнсний түүхий эд дэх пестицидийн агууламжийг шинжлэх, түүнчлэн органик бус нэгдлүүдийг ялгахад өргөнөөр ашигладаг. радиоизотопууд, лантанидууд, актинидууд гэх мэт. Ион солилцооны хроматографийг ашиглан ихэвчлэн хэдэн цаг, өдөр зарцуулдаг биополимер (уураг, нуклейн хүчил гэх мэт) -ийн шинжилгээг илүү сайн ялгах замаар 20-40 минутын дотор явуулдаг. Биологид ион солилцооны хроматографийг ашигласнаар дээжийг биологийн орчинд шууд ажиглах боломжтой болж, дахин зохион байгуулалт эсвэл изомержих боломжийг бууруулж, буруу тайлбарлахад хүргэдэг. эцсийн үр дүн. Биологийн шингэн дэх өөрчлөлтийг хянахын тулд энэ аргыг ашиглах нь сонирхолтой юм. Цахиурт гель дээр суурилсан сүвэрхэг сул анионы солилцоог ашиглах нь пептидүүдийг салгах боломжийг олгосон. В

Ион солилцооны механизмыг дараах тэгшитгэлээр илэрхийлж болно.

анионы солилцоонд зориулагдсан

X-+R+Y- h ->■ Y-+R+X-.

катион солилцоонд зориулсан |

X+ + R-Y+ h=* Y++R-X+.

Эхний тохиолдолд X~ дээжийн ион нь ион солилцуурын R+ ионы төвүүдийн хувьд хөдөлгөөнт фазын Y~ ионтой, хоёр дахь тохиолдолд X+ дээжийн катионууд нь R-ийн хувьд хөдөлгөөнт фазын Y+ ионуудтай өрсөлддөг. ~ ионы төвүүд.

Мэдээжийн хэрэг, ион солилцогчтой сул харилцан үйлчилдэг дээжийн ионууд энэ тэмцээний үеэр баганад сул үлдэж, түүнээс хамгийн түрүүнд угааж, харин эсрэгээр илүү хүчтэй хадгалагдсан ионууд баганаас хамгийн сүүлд ялгарна. . Ихэвчлэн BTqpH4Hbie-ийн ионик бус шинж чанартай харилцан үйлчлэл нь дээжийг матрицын ионик бус хэсэгтэй шингээх эсвэл устөрөгчийн холбоо, эсвэл хөдөлгөөнт фаз дахь дээжийн уусах чадвар хязгаарлагдмал зэргээс шалтгаалан үүсдэг. "Сонгодог" ион солилцооны хроматографийг "цэвэр" хэлбэрээр тусгаарлахад хэцүү байдаг тул зарим хроматографчид ион солилцооны хроматографийн онолын бус эмпирик зарчмуудыг үндэслэдэг.

Тодорхой бодисыг салгах нь юуны түрүүнд хамгийн тохиромжтой сорбент ба хөдөлгөөнт фазын сонголтоос хамаарна. Залгасан ионоген бүлэг бүхий ион солилцооны давирхай ба цахиурлаг гелийг ион солилцооны хроматографид хөдөлгөөнгүй фаз болгон ашигладаг.

2.4. ХЭСЭГТ ОРСОН ХРОМАТОГРАФИ

Хасагдах хроматограф бол сонголт юм! шингэний хроматографи бөгөөд энэ нь сорбентын нүх сүв дотор байрлах уусгагч ба урсаж буй уусгагчийн хооронд молекулуудын тархалтаас болж ялгарах үйл явц юм. " түүний хэсгүүдийн хооронд.

Бусад HPLC сонголтуудаас ялгаатай нь хаана тусгаарлах ирж байнаСорбентын гадаргуутай бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн харилцан үйлчлэл өөр өөр байдаг тул хэмжээ хасах хроматографи дахь хатуу дүүргэгчийн үүрэг нь зөвхөн тодорхой хэмжээний нүх сүв үүсгэх бөгөөд суурин үе шат нь эдгээр нүхийг дүүргэх уусгагч юм. Тиймээс эдгээр дүүргэгчдэд "сорбент" гэсэн нэр томъёог хэрэглэх нь зүйтэй тодорхой хэмжээгээрнөхцөлтэйгээр.

Аргын үндсэн шинж чанар нь бараг бүх молекул жингийн 10 2-аас 10 8 хүртэлх хэмжээтэй уусмал дахь молекулуудыг хэмжээнээс нь хамааруулан салгах чадвар бөгөөд энэ нь синтетик болон биополимерийг судлахад зайлшгүй шаардлагатай болгодог.

Уламжлал ёсоор, органик уусгагч дахь процессыг ихэвчлэн гель нэвчүүлэх хроматографи гэж нэрлэдэг бөгөөд усан системд гель шүүлтүүрийн хроматографи гэж нэрлэдэг. Энэ номонд англи хэлний "Хэмжээ хасах" гэсэн үгнээс гаралтай бөгөөд энэ үйл явцын механизмыг бүрэн тусгасан нэг нэр томъёог хоёуланг нь хоёуланг нь тусгасан болно.

Хэмжээ хасах хроматографийн үйл явцын талаархи маш нарийн төвөгтэй онолын талаархи одоо байгаа санаануудын нарийвчилсан дүн шинжилгээг монографи дээр хийсэн болно.

Багана дахь уусгагчийн нийт эзэлхүүн Vt (үүнийг ихэвчлэн баганын нийт эзэлхүүн гэж нэрлэдэг Вд хроматографийн процесст оролцдоггүй) нь хөдөлгөөнт болон суурин фазын эзлэхүүний нийлбэр юм.

Үл хамаарах баганад молекулуудыг хадгалах нь тэдгээрийн нүхэнд тархах магадлалаар тодорхойлогддог ба молекул ба нүхний хэмжээсийн харьцаанаас хамаардаг бөгөөд үүнийг схемийн дагуу Зураг дээр үзүүлэв. 2.15. Тархалтын коэффициент Ка,Хроматографийн бусад хувилбаруудын нэгэн адил энэ нь суурин болон хөдөлгөөнт фаз дахь бодисын концентрацийн харьцаа юм.

Хөдөлгөөнт болон суурин үе шатууд нь ижил найрлагатай тул Кд Хоёр үе шат нь адилхан хүртээмжтэй бодис нь нэгдмэл байдалтай тэнцүү байна. Энэ нөхцөл байдал нь хамгийн бага хэмжээтэй (уусгагчийн молекулуудыг оруулаад) бүх нүх сүв рүү нэвтэрдэг (2.15-р зургийг үз) ба баганаар хамгийн удаан хөдөлдөг молекулуудын хувьд хэрэгждэг. Тэдний хадгалах хэмжээ нь уусгагчийн нийт эзэлхүүнтэй тэнцүү байна Vt-

Цагаан будаа. 2.15. Хэмжээ хасах хроматографийн хэмжүүрээр молекулыг ялгах загвар

Хэмжээ нь сорбентын нүхний хэмжээнээс том бүх молекулууд тэдгээрт нэвтэрч чадахгүй (бүрэн хасагдах) ба бөөмс хоорондын сувгаар дамжин өнгөрдөг. Тэдгээр нь хөдөлгөөнт фазын V 0-ийн эзэлхүүнтэй тэнцүү хадгалах эзэлхүүнтэй баганаас ялгардаг - Эдгээр молекулуудын хуваалтын коэффициент нь тэг байна.

Зөвхөн зарим нүхийг нэвтлэх чадвартай завсрын хэмжээтэй молекулууд нь хэмжээнээсээ хамаарч баганад хадгалагддаг. Эдгээр молекулуудын тархалтын коэффициент нь тэгээс нэг хүртэл хэлбэлздэг бөгөөд өгөгдсөн хэмжээтэй молекулуудад хүрч болох нүхний эзэлхүүний хэсгийг тодорхойлдог.Тэдний хадгалагдсан эзэлхүүнийг V o ба нүхний эзлэхүүний хүртээмжтэй хэсгийн нийлбэрээр тодорхойлно.

ЧАНАРЫН ШИНЖИЛГЭЭ

Өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн салбарт нэвтэрч буй хроматографч нь чанарын шинжилгээний үндсийг мэддэг байх ёстой. Чанарын шинжилгээг шинэ аргаар олж авсан эсвэл бусад бүтээгдэхүүнтэй холилдсон бүтээгдэхүүнийг тодорхойлоход ашигладаг." Анагаах ухаан, шүүх эмнэлэг, экологи зэрэгт онцгой ач холбогдолтой биологийн болон химийн нарийн төвөгтэй хольцоос янз бүрийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тусгаарлахад зайлшгүй шаардлагатай. bioml.ter.ials дахь зарим эмийн химийн бүтээгдэхүүн, тэдгээрийн метаболит байгаа эсэхийг хянах зорилгоор.. "Чанарын үндэстэй танилцах" шинжилгээ нь нийтлэг алдаанаас зайлсхийхэд тусална, жишээлбэл, дээж дэх хольцыг уусгагч дахь хольцоос ялгах болно. нэгээс олон долгионы урттай спектрофотометр дээр бодисын цэвэр байдлыг шалгах, гэхдээ өөр өөр дээр гэх мэт.

Шинжилгээг үргэлжлүүлэхийн өмнө дээжийг бүхэлд нь өгөгдсөн уусгагч системээр баганаас ялгаруулж байгаа эсэхийг тодорхойлох шаардлагатай. Бүрэн шүүрсэн гэдэгт итгэлтэй байхын тулд баганаас урсаж буй бүх шингэнийг цуглуулж, уусгагчийг ууршуулж, үлдэгдлийг жинлэж, дээжийн сэргэлтийн зэргийг олох шаардлагатай.

HPLC-ийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тодорхойлох гурван аргаар хийгдэж болно: 1) хадгалах мэдээллийг ашиглах; 2) шингэн хроматографийн баганад ялгах явцад олж авсан бүсүүдийг спектрийн эсвэл химийн шинжилгээний аргуудыг ашиглан шалгах; 3) спектр анализаторыг баганад шууд холбоно.

Хадгалах хэмжээ нь хроматографийн оргил үеийг бүртгэхэд ашиглагддаг. V Р эсвэл хадгалах хугацаа т Р. Энэ хоёр хэмжигдэхүүн нь тухайн хроматографийн систем дэх бодисын шинж чанар юм. Салгаж буй бодисыг хадгалах хугацаа нь багана дахь харилцан үйлчлэлийн хугацаа болон хоолойн хоосон хэсгүүдийн дамжих хугацаанаас бүрддэг тул энэ нь багаж хэрэгсэл бүрт өөр өөр байдаг. Тухайн баганад хадгалагдаагүй бодисыг хадгалах хугацаа, эзэлхүүнийг стандарт болгон авч үзэх нь тохиромжтой. т 0 , В о. Бодис ба стандартын хроматографийг ижил нөхцөлд (даралт ба урсгалын хурд) хийх ёстой. Хадгалах өгөгдлөөр тодорхойлогдсон тохиолдолд дээжинд агуулагдаж болох мэдэгдэж буй бие даасан бодисуудыг ижил хроматографийн системд ялгаж, тэдгээрийн утгыг олж авдаг. т Р. Эдгээр утгыг харьцуулах т Р үл мэдэгдэх оргилыг хадгалах хугацаатай бол тэдгээр нь давхцаж байгааг олж мэдэх боломжтой бөгөөд энэ тохиолдолд оргилууд нь ижил бодистой тохирч байх магадлалтай, эсвэл т Р мэдэгдэж байгаа бодис тохирохгүй байна т Р үл мэдэгдэх бүс. Дараа нь утгыг ойролцоогоор тооцоолох боломжтой хэвээр байна т Р тэдгээрийн хадгалалтын зэргийг шууд хэмжих боломжгүй бодисууд. Хоёр сонголтыг хоёуланг нь авч үзье.

Эхний тохиолдолд дээжийн урьдчилсан судалгаа нь түүнд тодорхой бодис байгаа эсэхийг нотлох шаардлагатай нь ойлгомжтой. Энгийн хольцтой ажиллахдаа дээжийн бүс ба мэдэгдэж буй бодисын хадгалалтын зэрэг нь давхцаж байгаа эсэхийг тодорхойлоход хэцүү биш юм, өөрөөр хэлбэл утгууд. тБ ижил эсвэл өөр. Нарийн төвөгтэй хольцын хувьд ижил утгатай хэд хэдэн бодис ялгарч болно т Р, мөн хроматографийн салгах явцад бодитоор олж авсан бүсүүд давхцдаг. Үүний үр дүнд үнэн зөв утгыг олж авдаг т Р өөр өөр бүсэд боломжгүй болно. Тодорхойлолтын найдвартай байдал нь нягтрал ихсэх, тусгаарлах нөхцөлийг илүү болгоомжтой хянах, утгыг дахин хэмжих зэргээр нэмэгддэг. т Р болон олсон утгыг дундажлах. Энэ тохиолдолд мэдэгдэж байгаа болон үл мэдэгдэх бодисыг хроматографийн аргаар ялгах нь ээлжлэн солигдох ёстой. Нарийн төвөгтэй хольцыг салгахдаа утга т Р дээжийн матрицын нөлөөн дор бодисууд өөрчлөгдөж болно. Энэ нөлөө нь хроматограммын эхэн үед болон оргилууд давхцах үед боломжтой байдаг; Мөн дээр дурдсанчлан бүсүүдийг чангатгах боломжтой.

Ийм тохиолдолд стандартыг дээжинд 1:1 харьцаагаар нэмнэ.Хэрэв бодисууд ижил байвал утга т Р эхлэлийн материал өөрчлөгдөхгүй бөгөөд хроматограммд зөвхөн нэг оргилыг олж авдаг. Хэрэв та цикл хроматографийн системтэй төхөөрөмжтэй бол найдвартай танихын тулд хольцыг баганаар хэд хэдэн удаа нэвтрүүлэхийг зөвлөж байна.

Хадгаламжийн түвшингийн талаархи мэдээллийг уран зохиолоос олж болно, гэхдээ энэ мэдээллийн үнэ цэнэ хязгаарлагдмал. Нэг багцын багана нь дахин давтагдах чадвар муутай байдаг тул уран зохиолын утга нь жинхэнэ утгатай үргэлж тохирдоггүй. т Р энэ багана дээр. Харин адсорбцийн хроматографийн хувьд урьдчилан таамаглах боломжтой т Р уран зохиолын мэдээлэлд үндэслэсэн. Уран зохиолын утгыг ашиглахтай холбоотой өөр нэг бэрхшээл т Р, - Хроматографийн сэтгүүлд хэвлэгдсэн номзүйн тоймууд нь бодисын төрлөөр шинэчлэгдсэн индекстэй байдаг ч тусгай ном зохиолоос тэдгээрийг олоход бэрхшээлтэй байдаг.

Хоёрдахь тохиолдолд мэдэгдэж буй нэгдлүүдийг хадгалах хугацаа болон дээжийн бүсүүд давхцахгүй бол үл мэдэгдэх бүрэлдэхүүн хэсгийн хадгалалтын хугацааг урьдчилан таамаглах боломжтой. Стерикийг хасах хроматографийн бүтцийн өгөгдөлд үндэслэн харьцангуй хадгалалтын таамаглал нь нэлээд найдвартай юм. Эдгээр нь шингээлт ба хуваалтын хроматографийн нарийвчлал багатай байдаг, ялангуяа химийн холбоотой фаз дээр ажиллах үед. Мэдэгдэж буй p-тэй бодисын ион ба ион хос хроматографийн хувьд КаЗөвхөн утгыг ойролцоогоор тодорхойлох боломжтой tR. Харьцангуй хадгалалт эсвэл *x утгыг үнэмлэхүй утгуудаас урьдчилан таамаглах нь үргэлж хялбар байдаг к". Харьцангуй үнэ цэнэ т Р орлуулсан алкилкарбоксилын хүчил эсвэл бензолын дериватив зэрэг холбогдох нэгдлүүд эсвэл деривативуудыг үнэлэхэд хялбар байдаг.

Гомологууд эсвэл олигомеруудыг изократик байдлаар тусгаарлах үед заримдаа дараах загвар ажиглагддаг.

\ gk" = А + Bn,

Хаана АТэгээд IN- сонгосон хэд хэдэн дээж болон өгөгдсөн хроматографийн системийн тогтмол үзүүлэлтүүд (ижил багана дээр, хөдөлгөөнт болон суурин фазуудтай); П- дээжийн молекул дахь ижил бүтцийн нэгжийн тоо.

Дээжний молекулд функциональ бүлэг / оруулах нь өөрчлөлтөд хүргэнэ к" эхний тэгшитгэлд өгөгдсөн хроматографийн системд ямар нэг тогтмол коэффициент а/. Урвуу фазаас бусад бүх төрлийн хроматографийн функциональ бүлгүүдийн туйлшрал нэмэгдэхийн хэрээр тогтмолуудын утгууд багасах тусам утга нь нэмэгдэх болно. туйлшралыг нэмэгдүүлэх.

Төрөл бүрийн орлуулагч бүлгүүдийн a/ бүлгийн зарим тогтмолуудыг хүснэгтэд үзүүлэв. 9.1.

Адсорбцийн хроматографийн хувьд эхний тэгшитгэл нь бүх изомерууд ижил утгатай байх тохиолдолд хүчинтэй байдаг тул үргэлж хэрэглэгдэхгүй. к", Энэ нь үргэлж ажиглагддаггүй. Гэсэн хэдий ч нимгэн давхаргын хроматографийн үед ижил нэгдлүүдийн логфег "логфе" ба нэг багана дээрх ижил нэгдлүүдийн логфе"-ийг өөр багана дээр эсвэл харгалзах шинж чанаруудын эсрэг зурах боломжтой, жишээлбэл, log[(l- Rf) IRf].

Хадгалах өгөгдлийг харьцуулахдаа хүчин чадлын коэффициентийн утгыг ашиглаж болно к", Учир нь түүнээс ялгаатай т Р хөдөлгөөнт фазын хурд болон баганын геометрийн шинж чанарт нөлөөлөхгүй.

Химийн холбоо бүхий фазын салалт нь ижил төстэй фаз бүхий хуваалтын хроматографийн салалттай төстэй тул тогтвортой төлөвийн олборлолтын өгөгдлийг хадгалах хугацааг урьдчилан таамаглахад ашиглаж болно.

Ион солилцооны хроматографийн хувьд хадгалалтын зэрэгт гурван хүчин зүйл нөлөөлдөг: хүчил ба суурийн иончлолын зэрэг, ионжуулсан молекулын цэнэг, ион солилцооны хроматографид ашигласан усан хөдөлгөөнт фазын бодисын органик бодис руу шилжих чадвар. үе шат. Сүүлийнх нь нэгдлийн молекул жин ба түүний гидрофобик чанараас хамаарна. Тиймээс анионы солилцоо эсвэл катионы солилцооны үед илүү хүчтэй хүчил эсвэл суурь нь илүү хүчтэй хадгалагддаг. Буурах үед pK aдээжинд орсон бие даасан хүчлийн хувьд анионы солилцооны улмаас хэд хэдэн хүчил ялгарах үед хадгалалт ихсэх ба p/C o ихсэх тусам катион солилцооны улмаас суурийн хадгалалт нэмэгддэг.

Тиймээс мэдэгдэж буй бодисыг хадгалах хугацаа нь ажиглагдсан бодистой давхцаж байгаа нь тэдгээрийн мөн чанарыг тодорхойлох боломжийг олгодог. Мэдэгдэж буй бодис ба үл мэдэгдэх бүрэлдэхүүн хэсгийн хроматограммыг өөр өөр нөхцөлд харьцуулж үзвэл таних найдвартай байдал нэмэгддэг. Хэрэв бодисууд шингээлтийн болон урвуу фазын эсвэл ион солилцооны болон хэмжээсийг хасах хроматографийн үед ижил төстэй үйлдэл хийвэл таних найдвартай байдал нэмэгддэг. Хэрэв харьцангуй ижил төстэй хадгалалт бүхий таних найдвартай байдал нь 90% байвал ижил бодисын зан төлөвийг мэдэгдэхүйц өөр нөхцөлд судлахад таних найдвартай байдал аль хэдийн 99% байна.

Тодорхойлоход ашигладаг бодисын үнэ цэнэтэй шинж чанар нь тухайн бодисыг хоёр өөр детектор дээр авсан дохионы харьцаа юм. Шинжилсэн бодис нь баганаас гарсны дараа эхлээд эхний мэдрэгчээр, дараа нь хоёр дахь детектороор дамждаг бөгөөд детекторуудаас ирж буй дохиог олон үзэг бичигч эсвэл хоёр бичигч дээр нэгэн зэрэг бүртгэдэг. Ихэвчлэн хэт ягаан туяаны мэдрэгчийг (илүү мэдрэмтгий, гэхдээ сонгомол) рефрактометр эсвэл флюресцент мэдрэгч бүхий хэт ягаан туяа эсвэл өөр өөр долгионы уртад ажилладаг хоёр хэт ягаан туяаны детекторын цуврал холболтыг ашигладаг. Харьцангуй хариу үйлдэл, өөрөөр хэлбэл рефрактометрийн дохионы фотометрийн дохионы харьцаа нь хоёр детектор нь шугаман мужид ажилладаг бол тухайн бодисын шинж чанар юм; Энэ нь ижил бодисыг өөр өөр хэмжээгээр хэрэглэх замаар туршиж үздэг. Урсгалын үүрэнд байх баганаас гарч буй оргилын спектрийг мэдэгдэж байгаа нэгдлийн спектртэй харьцуулан бүртгэх боломжийг олгодог урсгалыг зогсоох төхөөрөмжөөр тоноглогдсон фотометрийн детекторуудтай ажиллах замаар чанарын мэдээллийг олж авах боломжтой.

Орчин үеийн, үнэтэй хэвээр байгаа, диодын массив бүхий спектрофотометрүүд нь танихад ихээхэн сонирхол татдаг.

Бүрэн үл мэдэгдэх бодисыг зөвхөн өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн тусламжтайгаар тодорхойлох боломжгүй бөгөөд бусад аргууд шаардлагатай.

ТООН ШИНЖИЛГЭЭ

Тоон шингэний хроматографи нь тоон хийн хроматографиас дутахгүй, TLC буюу электрофорезийн нарийвчлалаас илт давсан сайн боловсруулсан аналитик арга юм.Харамсалтай нь HPLC-д химийн янз бүрийн бүтэцтэй нэгдлүүдийг маш сайн мэдэрдэг детектор байдаггүй. GLC дахь катарометр шиг) Тиймээс тоон үр дүнг авахын тулд төхөөрөмжийн шалгалт тохируулга хийх шаардлагатай.

Тоон шинжилгээ нь дараах үе шатуудаас бүрдэнэ: 1) хроматографийн аргаар ялгах; 2) оргил газар буюу өндрийг хэмжих; 3) хроматографийн мэдээлэлд үндэслэн хольцын тоон найрлагыг тооцоолох; 4) олж авсан үр дүнгийн тайлбар, өөрөөр хэлбэл статистик боловсруулалт. Эдгээр бүх үе шатуудыг авч үзье.

4.1. ХРМАТОГРАФИК САЛДАХ

Дээж цуглуулах явцад алдаа гарч болзошгүй. Алдаа гаргахаас зайлсхийх, нэг төрлийн хатуу бодис, дэгдэмхий эсвэл тогтворгүй бодис, хөдөө аж ахуйн бүтээгдэхүүн, биоматериалын зохих төлөөллийн дээжийг авах нь онцгой чухал юм. Нэг төрлийн бус дээжийг, жишээлбэл, хүнсний бүтээгдэхүүнийг сайтар хольж, дөрөвний нэгээр нь хуваана. Энэ үйлдлийг олон удаа хийснээр дээжийн нэгэн төрлийн байдалд хүрнэ.

Бодисын алдаа, алдагдлыг олборлох, тусгаарлах, цэвэршүүлэх гэх мэт үе шатанд хийж болно.

Дээжийг бүрэн уусгаж, уусмалыг нь ±0.1% нарийвчлалтайгаар бэлтгэсэн байх ёстой. Дээжийг хөдөлгөөнт үе шатанд уусгах нь зүйтэй бөгөөд энэ нь хроматографт оруулсны дараа түүний хур тунадас үүсэх магадлалыг арилгана. Хэрэв хөдөлгөөнт үе шатанд уусгах боломжгүй бол түүнтэй холилдох уусгагчийг хэрэглэж, дээжийн хэмжээг (25 мкл-ээс бага) хроматограф руу оруулна.

Дээжийг шахах явцад дээжийн хуваагдал, гоожих, түрхэц ихсэх зэргээс шалтгаалан томоохон алдаа гарч болно. Оргилуудын бүдэгрэх нь сүүл үүсэхэд хүргэдэг бөгөөд энэ нь оргилуудын хэсэгчлэн давхцаж, улмаар илрүүлэх явцад алдаа гаргахад хүргэдэг. Нарийвчлал өндөр, операторын хамаарал бага тул тоон шинжилгээнд дээж оруулах тариураас гогцоо хавхлагатай төхөөрөмжийг илүүд үздэг.

Бодисыг хроматографаар ялгах үед өгөгдлийг гажуудуулахад хүргэдэг хүндрэлүүд үүсч болно: тоон шинжилгээ. Хроматографийн процессын явцад дээжийн задрал, хувирал эсвэл багана руу бодисын эргэлт буцалтгүй шингээлт байж болно. Эдгээр хүсээгүй үзэгдлүүд байхгүй байх нь чухал бөгөөд шаардлагатай бол баганыг сэргээх эсвэл солих нь чухал юм. Хроматографийн нөхцлүүдийг өөрчилснөөр оргил давхцал болон хаягдлыг багасгаж болно.

Хуурамч эсвэл тодорхой бус хэлбэртэй оргилууд, түүнчлэн суллах хугацаа нь ойрхон байгаа оргилууд руу, Учир нь тэдний тусгаарлалт хангалтгүй байж магадгүй юм. Ихэвчлэн d"^0.5 утгатай оргилуудыг ашигладаг. 1г сорбент тутамд 10~ 5 -10~ 6 г ууссан бодисыг нэвтрүүлэх замаар баганын хамгийн өндөр үр ашигт хүрдэг. Дээжийг их хэмжээгээр нэвтрүүлэх үед Ачаалал дээрх оргил өндөр нь шугаман бус байж болох бөгөөд оргил цэгүүдийн тоон үнэлгээ шаардлагатай.

Илрүүлэх эсвэл олшруулахтай холбоотой алдаа нь хроматографийн салалтын үр дүнг ихээхэн гажуудуулахад хүргэдэг. Илрүүлэгч бүр нь өвөрмөц байдал, шугаман байдал, мэдрэмжээр тодорхойлогддог. Сонгох чадварыг шалгах нь ул мөрийн хольцыг шинжлэхэд онцгой чухал юм. Хэт ягаан туяаны мэдрэгчийн хариу үйлдэл нь ижил төстэй функциональ бүлэгтэй бодисуудад 104 дахин өөр байж болно. Шинжлэх бодис бүрийн хувьд детекторын хариуг тохируулах шаардлагатай. Мэдээжийн хэрэг, хэт ягаан туяаны бүсэд шингэдэггүй бодисууд нь фотометрийн мэдрэгч болгон ашиглах үед бичигч рүү дохио өгөхгүй. Рефрактометр ашиглах үед сөрөг оргилууд гарч ирж болно. Үүнээс гадна, энэ мэдрэгч нь термостаттай байх ёстой бөгөөд энэ нь хэт ягаан туяаны мэдрэгчийн хувьд шаардлагагүй юм.

Илрүүлэгчийн шугаман чанар нь тарьсан дээжийн хэмжээг тодорхойлдог. Баганын урсгалын хурд, багана ба детекторын температур, детекторын дизайн зэрэг нь тоон шинжилгээний нарийвчлалд нөлөөлдөг гэдгийг санах нь чухал юм. Гаралтын төхөөрөмж (бичигч), интегратор эсвэл компьютерт цахилгаан дохиог дамжуулахад алдаа гарах нь дуу чимээний индукц, газардуулга байхгүй, сүлжээнд хүчдэлийн хэлбэлзэл гэх мэт зэргээс шалтгаалж болно.

4.2. ОРГИЛ ТАЛБАЙ БУЮУ ӨНДӨРИЙН ХЭМЖЭЭ

Оргил өндөр h (Зураг 10.1) нь оргилын оройгоос суурь хүртэлх зай бөгөөд үүнийг шугаман аргаар буюу бичигч дээрх хуваагдлын тоог тоолох замаар хэмждэг. Зарим цахим интеграторууд болон компьютерууд оргил өндрийн талаарх мэдээллийг өгдөг. Шилжилтийн оргилуудын суурь шугамын байрлалыг оргилын эхлэл ба төгсгөлд харгалзах ордны утгуудыг интерполяци хийх замаар олно. 1 ба 3зургийг үзнэ үү. 10.1). Нарийвчлалыг сайжруулахын тулд хавтгай, тогтвортой суурьтай байх шаардлагатай. Хуваагдаагүй оргилуудын хувьд үндсэн шугамыг тэг шугамаар солихын оронд оргилын эхлэл ба төгсгөлийн хооронд зурдаг. Оргил өндөр нь зэргэлдээ давхцаж буй оргилуудын нөлөөллөөс бага хамааралтай байдаг тул оргил өндрийн тооцоолол нь илүү нарийвчлалтай бөгөөд ул мөрийн шинжилгээнд бараг үргэлж ашиглагддаг.

Оргил талбайг янз бүрийн аргаар тодорхойлж болно. Тэдний заримыг нь харцгаая.

1. Планиметрийн арга нь оргилын талбайг механикаар тодорхойлох төхөөрөмж болох гарт баригдсан планиметрээр оргилыг мөшгих явдал юм. Энэ арга нь үнэн зөв боловч хөдөлмөр их шаарддаг, дахин үржих чадвар муутай. Энэ аргыг хэрэглэхийг зөвлөдөггүй.

2. Цаасны дүрсний арга - оргилыг нь хайчилж, жинлэнэ. Энэ арга нь маш их давтагдах чадвартай боловч хөдөлмөр их шаарддаг бөгөөд хроматограмм нь устдаг. Түүний хэрэглэх чадвар нь диаграммын туузны жигд байдлаас хамаарна. Энэ аргыг өргөнөөр санал болгох боломжгүй юм.

4. Гурвалжингийн арга нь оргилын хажуу тал руу шүргэгч зурж гурвалжин байгуулахаас бүрдэнэ. Гурвалжингийн орой нь оргилын оройноос өндөр байна. Энэхүү өргөтгөсөн оройноос үүссэн талбайг нэмэгдүүлэх нь хроматограммын туршид жигд байх бөгөөд нарийвчлалд төдийлөн нөлөөлөхгүй. Түүнчлэн шүргэгчийг зурахад алдсан зарим хэсгийг нөхөн төлнө. Гурвалжны суурь нь шүргэгчийг суурийн шугамтай огтлолцох замаар, талбайг 7 г суурь ба өндрийн үржвэрээр тодорхойлно. Энэ арга нь тэгш бус оргилуудын талбайг тодорхойлоход хамгийн тохиромжтой. Гэсэн хэдий ч, өөр өөр операторууд шүргэгч үүсгэх үед давтагдах чадвар өөр өөр байдаг тул; бага.

5. Дискний интеграторын арга нь дуу хураагуурт залгагдсан цахилгаан механик төхөөрөмж дээр суурилдаг. Интеграторт бэхлэгдсэн үзэг нь соронзон хальсны доод хэсэгт байрлах туузны дагуу бичигч үзэгний хөдөлгөөнтэй пропорциональ хурдтайгаар хөдөлдөг.

Гарын авлагын хэмжилтийн нэгэн адил оргил цэг нь бичигч хэмжигдэхүүн дээр хэвээр байх ёстой боловч суурь шилжилт, зэргэлдээх оргилуудын бүрэн бус тусгаарлалтыг нөхөх тохируулга нь найдвартай байдлыг бууруулж, шинжилгээний хугацааг уртасгадаг.

Энэ арга нь гар аргаар хэмжилт хийх аргуудаас илүү нарийвчлалтай, ялангуяа тэгш бус оргилуудын хувьд илүү нарийвчлалтай бөгөөд хурдны давуу талыг санал болгодог. Үүнээс гадна, энэ нь шинжилгээний байнгын тоон бүртгэлийг өгдөг.

6. Оргил талбайг тодорхойлох цахим интегратор ашиглах арга, тухайн хэсгийн талаарх мэдээллийг хэвлэх, хадгалах хугацаа нь суурь өөрчлөлтийг засах ба зөвхөн хэсэгчлэн шийдэгдсэн оргилуудын талбайг тодорхойлох боломжтой. Гол давуу тал нь нарийвчлал, хурд, дуу хураагчийн үйл ажиллагаанаас хараат бус байдал юм. Интеграторууд нь санах ойтой бөгөөд урьдчилан суулгасан програмыг ашиглан тодорхой шинжилгээнд зориулж програмчлах боломжтой. Интеграторын давуу тал нь детекторын янз бүрийн бодисуудад мэдрэмтгий байдлын ялгааг нөхөж, оргил цэгүүдийн анхны өгөгдлийг дахин тооцоолохдоо детекторын хариу үйлдэлд залруулах хүчин зүйлийг ашиглах чадвар юм. Ийм систем нь цаг хугацаа хэмнэж, аналитик нарийвчлалыг сайжруулж, ердийн аналитик шинжилгээнд тустай.

7. Шингэн хроматографийн хувьд оргил цэгүүдийг хэмжихэд компьютерийг өргөн ашигладаг. Тэд бодисын нэр, оргил цэгүүд, хадгалах хугацаа, детекторын хариу үйлдлийг засах хүчин зүйл, дээжийн төрөл бүрийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн элбэг дэлбэг байдал (хүн%) зэргийг багтаасан бүрэн мессежийг хэвлэдэг.